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| 1 | 家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析显示文摘目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能。构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta(DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体。运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况。结果家蝇GAPDH基因ORF全长999bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta(DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别。结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用。 | 胡红元 任春丽 尚小丽 陈明明 王宇 王涛 吴建伟 | 2016 | 中国病原生物学杂志2016，11，3： | 6 |
| 2 | 家蝇核糖体蛋白S18基因的克隆及表达模式研究显示文摘旨为证实核糖体蛋白S18(Ribosomal protein S18,RPS18)基因在家蝇体内的表达稳定性。从构建家蝇幼虫c DNA文库中筛选到核糖体蛋白S18基因,以c DNA为模板,通过PCR扩增,获得RPS18基因完整编码序列(登录号:KT006855),运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建p ET28a/RPS18重组质粒,转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中进行诱导表达及蛋白纯化,制备多克隆抗体并进行抗血清特异性分析。应用RT-PCR、q PCR及Western-blot从转录、翻译水平上分析RPS18基因在家蝇不同发育时期和三龄幼虫不同组织中的表达情况。结果表明,RPS18基因ORF全长459 bp,编码152个氨基酸,理论分子量为17 590.5 Da,等电点为10.48;将构建的重组质粒转入大肠杆菌Transetta(DE3)中,纯化得到RPS18蛋白;将该纯化蛋白免疫大白兔获得多克隆抗体,His单抗鉴定及抗血清特异性分析显示,其均可见单一条带;RT-PCR、q PCR及Westernblot分析表明,RPS18基因在家蝇不同发育时期及幼虫不同组织均能够稳定表达;综合分析表明,该基因在家蝇不同发育时期及幼虫不同组织均保持较好的表达稳定性。 | 胡亚 卢诚 魏川川 修江帆 吴建伟 | 2016 | 生物技术通报2016，32，6： | 5 |
| 3 | Identification of reference genes for qRT-PCR in human lung squamous-cell carcinoma by RNA-Seq显示文摘尽管量的即时聚合酶链反应(qRT-PCR ) 的精确性高度依赖于可靠 referencegenes,许多通常使用的参考基因稳定地没被表示并且不对 quantification 和 normalizationof qRT-PCR 数据作为这合适。这研究的目的是在肺识别新奇可靠参考基因有鳞房间的癌。定序的 Weused RNA (RNA-Seq ) 取样在 5 肺正常调查整个染色体表示并且 44 肺有鳞房间的 carcinomasamples。我们评估了 15 通常使用的引用基因的表达式侧面并且识别了五另外的 candidatereference 基因。验证 RNA-Seq 数据集,我们使用了 qRT-PCR 在有鳞房间的癌取样的 100 正常的肺织物和肺的 separateset 验证这 20 基因的表示层次,然后用 geNormand NormFinder 分析了这些结果。关于 15 普通引用基因( B2M , GAPDH , GUSB , HMBS , HPRT1 , IPO8 , PGK1 , POLR2A , PPIA , RPLP0 , TBP , TFRC , UBC ,和 YWHAZ )中的 14 个,表达式层次也是低的容易被检测,或展出了 betweenlung 正常和有鳞房间的癌取样或一样的织物类型在甚至之中取样的可变性的高度。相反, 15 commonreference 基因(ACTB ) 和 5 另外的候选人参考基因(EEF1A1, FAU, RPS9, RPS11,和 RPS14 ) 中的 1 个稳定地并且组成地在测试的所有样品在高水平被表示。ACTB, EEF1A1, FAU, RPS9, RPS11,和 RPS14 是为肺的 qRT-PCR 分析的理想的参考基因有鳞房间的癌,当 14 通常使用了 qRT-PCR 时, referencegenes 在这上下文是不太适当的。 | Cheng Zhan Yongxing Zhang Jun Ma Lin Wang Wei Jiang Yu Shi Qun Wang | 2014 | Acta Biochimica et Biophysica Sinica2014，46，4： | 3 |
| 4 | Campylobacterjejuni in Musca domestica: An examination of survival and transmission potential in light of the innate immune responses of the house flies显示文摘房子苍蝇,蝇属 domestica,作为 Campylobacter spp 的向量被含有,人的疾病的一个主要原因。很少被知道房子苍蝇是否为 Campylobacter jejuni 提供同样生物的放大主人或机械向量。我们在 C 以后调查了时期。jejuni 被房子苍蝇在摄取了它可行 C。jejuni 殖民地能从整个身体, vomitus 和成年 M 的粪便被孤立。domestica 并且评估了对摄取的 C 的房子苍蝇的天生的有免疫力的回答的激活。jejuni 随着时间的过去。C。jejuni 能此后不久从感染的家蝇是有教养的摄取而是没有可计算的 C。jejuni 殖民地被观察 > 24 h postingestion。我们检测了可行 C。在直到在摄取以后的 4 h 的房子苍蝇 vomitus 和粪便的 jejuni,而是没有可行细菌被检测 8 h。抑制减少性的杂交在摄取 C 以后在成年房子苍蝇 4-24 h 的肠的道识别了导致病原体的基因表示。jejuni。我们测量了免疫者的表示规章(thor, JNK,和 spheroide ) 并且受动器(cecropin, diptericin, attacin, defensing,和溶解酵素) 在 C 的基因。感染 jejuni 并且用量的实时 PCR 的 -uninfected 房子苍蝇。因素的某房子苍蝇因素,或联合,消除 C。在 24 h postingestion 以内的 jejuni。因为 C。jejuni 没在家蝇的身体以内被放大,这只昆虫多半用作机械向量而非作为一真生物,为 C 放大向量。jejuni,并且增加我们昆虫病原体相互作用的理解。 | Carson Gill Simon Bahrndorff Carl Lowenberger | 2017 | Insect Science2017，24，4： | 1 |
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