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| 1 | 甘草查尔酮A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肾癌细胞自噬的研究显示文摘研究甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对肾癌细胞自噬的影响,并探讨其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路的调控作用。实验以肾癌细胞系786-O,769-P细胞为研究对象,采用MTT检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞自噬状态;Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞中绿色点状聚集的自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白的表达,PI3K/Akt/m TOR信号通路的变化,以及抑制该通路后检测诱导自噬的变化。结果表明,LCA抑制细胞增殖呈时间-浓度依赖性,同时剂量依赖性地抑制细胞迁移和侵袭;LCA能够诱导细胞内酸性自噬泡和自噬小体的增多;LCA可明显诱导LC3-Ⅱ,beclin 1,Atg5蛋白表达,降低p62蛋白表达,同时减少Akt,m TOR的磷酸化。使用PI3K/Akt抑制剂(LY294002)以及m TOR抑制剂(rapamycin,Rap)可促进LCA诱导自噬的发生。以上结果提示,LCA通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路进而抑制肾癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导肾癌细胞发生自噬。 | 辛红 徐巍 | 2018 | 中国中药杂志2018，43，17： | 16 |
| 2 | 异甘草素对人肾透明细胞癌786-O细胞抗癌作用及分子机制显示文摘目的:研究异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)对人肾透明细胞癌786-O细胞的抗癌作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法:通过噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测ISL(0,10,25,50,75,100μmol·L^(-1))对786-O细胞增殖的作用;细胞划痕和Transwell实验检测ISL对786-O细胞迁移、侵袭能力的影响;吖啶橙染色,Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞自噬状态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白的表达,并分析磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路变化,探讨其可能的作用机制。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,ISL能够明显抑制786-O细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性(P<0.05);划痕和Transwell实验结果表明,与空白组比较,ISL能够抑制785-O细胞的迁移和侵袭(P<0.05);吖啶橙染色和Ad-GFP-LC3转染实验表明ISL能够诱导786-O细胞发生自噬。此外,与空白组比较,ISL能够诱导细胞内自噬标志物-Ⅱ(LC3-Ⅱ),自噬相关蛋白Beclin1,Atg5蛋白表达(P<0.05),并显著下调p62蛋白表达(P<0.05),当加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)可逆转上述现象(P<0.05);同时ISL能够抑制Akt,m TOR的磷酸化水平(P<0.05),加入抑制剂LY294002和雷帕霉素(rapamycin,Rap),LC3-Ⅱ,Beclin1,Atg5蛋白表达明显上调(P<0.05),p62蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:ISL能够抑制肾透明细胞癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路诱导细胞发生自噬。 | 辛红 孙鹏然 宋鹏 徐巍 | 2019 | 中国实验方剂学杂志2019，25，12： | 14 |
| 3 | 增龄对大鼠睾丸自噬水平和血睾屏障完整性的影响显示文摘目的探究增龄过程中大鼠睾丸自噬水平的变化及其对血睾屏障的影响。方法HE染色法观察6、12、18和24月龄SD♂大鼠睾丸组织形态学的变化。Western blot法检测各组大鼠睾丸自噬相关蛋白Beclin1、ATG5、ATG7和LC3Ⅱ,以及血睾屏障相关蛋白Occludin和β-catenin的表达水平变化。免疫荧光法检测睾丸自噬相关蛋白Beclin1和LC3,以及血睾屏障相关蛋白β-catenin的蛋白表达及定位。结果HE染色观察发现,增龄过程中大鼠睾丸组织形态结构发生明显变化,生精小管萎缩,生精细胞层数减少,细胞间间隙增大,且发生部分脱落现象;Western blot结果显示,增龄过程中大鼠睾丸自噬相关蛋白Beclin1、ATG5、ATG7和LC3Ⅱ,以及Occludin和β-catenin表达水平均逐渐下降;免疫荧光结果显示,增龄过程中大鼠睾丸生精小管上皮细胞中Beclin1和LC3蛋白表达逐渐下调,并且血睾屏障标志蛋白β-catenin表达也逐渐下降。结论增龄过程中大鼠睾丸生精功能减退,其机制与睾丸生精上皮细胞自噬水平下降,进而破坏血睾屏障的完整性有关。 | 尤旭 赵海霞 马琼艳 杨思琪 张艳 杨圆 叶勇 袁丁 张长城 | 2020 | 中国药理学通报2020，36，1： | 6 |
| 4 | 太平洋鳕ATG5基因的克隆及表达分析显示文摘ATG5(Autophagy related gene 5)基因是一种自噬相关基因,是形成自噬体的重要基因,ATG5基因的表达对自噬调控的成熟有重要作用。本研究中通过克隆,首次得到太平洋鳕Gadus macrocephalus ATG5c DNA部分序列,该序列长为895 bp,含有完整的开放阅读框(Open reading frame,ORF),编码275个氨基酸,其编码的蛋白质相对分子量约为32 200;经核苷酸序列比对发现,太平洋鳕ATG5核苷酸序列与半滑舌鳎Cynoglossus semilaevis、尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus ATG5核苷酸序列的相似性均高达87.27%;利用太平洋鳕与其他物种ATG5核苷酸序列构建系统进化树,结果显示,ATG5核苷酸序列系统进化树反映的亲缘关系基本符合传统分类学观点;氨基酸序列分析结果显示,ATG5蛋白氨基酸序列具有较高的保守性;利用绝对荧光定量PCR方法对ATG5基因在太平洋鳕各组织中的转录水平进行检测,结果显示,肝、脾和肾中的表达量高于其他组织,鳃、肾、脾、脑、肝和肌肉各组织中的ATG5 mRNA拷贝数分别为11.617 08、20.449 25、19.706 87、4.839 84、27.434 97、2.954 75 copies/ng。本研究结果将为进一步研究太平洋鳕细胞吞噬机制奠定基础,也为太平洋鳕的免疫机理和相关研究提供基础数据。 | 孙航 毛明光 蒋洁兰 姜志强 李幸 温施慧 | 2015 | 大连海洋大学学报2015，30，5： | 4 |
| 5 | 小檗碱衍生物9-OH小檗碱的抗帕金森病活性和作用机制研究显示文摘目的:探究小檗碱衍生物9-OH小檗碱对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine hydrochloride,MPTP)诱导的斑马鱼帕金森病(Parkinson’s disease,PD)症状是否具有缓解作用。方法:受精后1 d(day post fertilization,dpf)的斑马鱼胚胎,设置空白对照组,50μmol·L^(-1)MPTP造模组,50μmol·L^(-1)MPTP与不同质量浓度(100,300,500μmol·L^(-1))9-OH小檗碱共处理组。4 dpf时,分别观察并记录各组斑马鱼多巴胺神经元及脑部血管的发育情况;5 dpf时,监测行为学,记录各组行为学数据并分析差异,收集后检测PD相关基因表达变化,包括编码α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)的α-syn、编码E3泛素连接酶(E3 ubiquitin protein ligase,Parkin)的parkin、编码自噬相关基因5(autophagy related gene 5,Atg5)的atg5、编码微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,Lc3b)的lc3b。结果:MPTP造模组的斑马鱼多巴胺神经元和脑部血管出现不同程度的损伤,且出现运动迟缓、焦虑等PD状行为,与PD相关的基因表达也出现异常;而MPTP与9-OH小檗碱共处理组的斑马鱼多巴胺神经元和脑部血管的损伤得到改善,行为学能力得到恢复,且PD相关基因的表达趋于正常。结论:小檗碱衍生物9-OH小檗碱对MPTP诱导的斑马鱼帕金森病症状有缓解作用。 | 牟蕾 高代丽 王利振 刘可春 靳梦 | 2022 | 中国医院药学杂志2022，42，9： | 2 |
| 6 | Atg5在肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠纹状体和脑干中表达降低显示文摘目的研究自噬相关基因Atg5在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠纹状体和脑干中的表达情况,探讨Atg5与ALS发病的关系。方法分别取ALS转基因小鼠和同窝野生型小鼠95d、108d和122d的纹状体和脑干,应用免疫荧光技术检测Atg5在纹状体和脑干中的表达及与神经元的共定位关系,应用q RT-PCR技术检测Atg5 m RNA表达情况,应用Western blot技术检测蛋白表达的改变。结果免疫荧光双标染色检测发现,ALS转基因小鼠和野生型小鼠纹状体和脑干中Atg5阳性细胞与β-tubulinⅢ标记的神经元共表达;与野生型小鼠比较,ALS转基因小鼠纹状体和脑干内舌下神经核和面神经核中Atg5免疫反应性降低;q RT-PCR分析显示,ALS转基因小鼠纹状体内Atg5 m RNA表达水平在95d、108d和122d时均显著低于同窝野生型小鼠纹状体内Atg5 m RNA表达水平;脑干内Atg5 m RNA表达水平在108d和122d时均显著低于同窝野生型小鼠脑干内Atg5 m RNA表达水平;Western bot分析显示,与野生型小鼠比较,ALS转基因小鼠纹状体和脑干内Atg5蛋白表达水平在108d和122d时显著降低。结论 ALS转基因小鼠纹状体和脑干中Atg5的表达降低,提示Atg5调控的自噬改变与ALS发病关系密切。 | 刘金梦 管英俊 陈燕春 刘永新 王巧真 周风华 王箐 | 2018 | 中国组织化学与细胞化学杂志2018，27，3： | 0 |
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