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| 1 | 5HRE增强子和hTERT启动子联合调控CDX2基因对人结肠癌细胞系LoVo增殖的抑制显示文摘目的:检测已构建的缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)和人端粒酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控CDX2基因表达的载体pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG(5HhC)对人结肠癌细胞系LoVo增殖的影响。方法:复苏前期筛选的转染pLVX-hTERTp-CDX2-3FLAG(hC)的LoVo细胞(hC/LoVo)、转染pLVX-5HREhTERTp-3FLAG(5Hh)的LoVo细胞(5Hh/LoVo)、转染pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG(5HhC)的LoVo细胞(5HhC/LoVo)及空白LoVo细胞,各组细胞均在常氧条件和缺氧条件(加入缺氧模拟剂CoCl2)展开实验。MTT检测细胞增殖情况,平板克隆实验观察细胞集落形成,流式细胞术分析细胞周期。结果:成功复苏转染5HhC的LoVo细胞及各组对照LoVo细胞。hC/LoVo、5HhC/LoVo细胞增殖显著低于LoVo及5Hh/LoVo,且缺氧微环境下的5HhC对于LoVo细胞的增殖速度抑制更为明显[细胞增殖率,第5天,常氧vs缺氧:(48.62±3.32)%vs(36.81±2.83)%,P<0.05;第7天,常氧vs缺氧:(56.44±2.28)%vs(38.51±3.21)%,P<0.05]。hC/LoVo、5HhC/LoVo组的平板克隆数显著低于LoVo及5Hh/LoVo组,且缺氧微环境下的5HhC对LoVo细胞集落形成能力的抑制较常氧环境下更为显著[集落数:(44.2±3.5)个vs(90.8±9.3)个,P<0.05];hC/LoVo、5HhC/LoVo组G1期细胞比例较LoVo细胞及5Hh/LoVo组明显提高[(63.59±0.55)%、(64.82±2.22)%vs(51.38±0.70)%、(51.59±0.38)%,P<0.05],且在缺氧微环境下,5HhC/LoVo组G1期细胞比例提高更加显著[(71.38±3.02)%vs(64.82±2.22)%,P<0.05]。结论:治疗载体5HhC可使人结肠癌细胞系LoVo发生G1期阻滞,增殖及集落形成能力受到抑制,且在缺氧诱导下5HhC的抑制能力更为显著。 | 贺赛 郑见宝 孙学军 陈南征 周培华 魏光兵 王晖 姚建锋 张立 贾蓬勃 | 2014 | 中国肿瘤生物治疗杂志2014，21，3： | 4 |
| 2 | 结直肠癌蛋白质标志物研究进展显示文摘结直肠癌是世界范围内发病率和致死率最高的恶性肿瘤之一。可靠的肿瘤标志物对指导结直肠癌的诊断、监测治疗效果及预测患者的预后有重要意义。除了临床应用最早也是最广泛的标志物癌胚抗原(CEA)外,近年来,结直肠癌相关标志物研究方面取得了快速进展。笔者主要从血浆、组织及粪便蛋白质标志物3个方面,介绍近年来结直肠癌相关蛋白质标志物的研究进展。 | 崔琳 李立奇 | 2014 | 中国普通外科杂志2014，23，4： | 3 |
| 3 | MDR1启动子的活性研究显示文摘目的:克隆编码多药耐药基因-1(MDR1)中不同长度的启动子片段并探讨和比较其在乳腺癌细胞中的转录活性。方法:利用PCR扩增技术以MCF-7/ADR细胞基因组为模板克隆3种不同长度的启动子片段。pGL3-basic的启动区域中,构建一系列报告基因载体pGL3-MDR1Pn。以pGL3-control为阳性对照,分别将含不同长度的MDR1启动子的报告基因载体pGL3-MDR1Pn与p RL-TK以一定比例共转染到敏感的MCF-7细胞和耐阿霉素的MCF-7/ADR细胞,通过分析表达的荧光素酶的活性比较不同长度的启动子片段在这两种细胞中的转录活性。结果:酶切鉴定和测序验证了已将不同长度的MDR1启动子片段成功插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,且克隆的片段中没有出现碱基突变。将表达载体转染细胞后活性检测结果显示,pGL3-MDR1P1、pGL3-MDR1P2和pGL3-MDR1P3在MCF-7中活性分别为阳性对照的(13.03±2.35)%、(14.60±3.57)%和(10.27±1.89)%;而在MCF-7/ADR中活性分别为阳性对照的(105.26±6.84)%、(59.08±4.95)%和(62.39±5.76)%。结论:成功克隆了MDR1启动子片段,并成功构建了荧光素酶报告基因载体pGL3-MDR1P。启动子的活性分析结果初步表明长度约为2 000 bp的MDR1P1在MCF-7/ADR中具有相对较高的特异性。 | 刘蕊 | 2017 | 天津医科大学学报2017，23，1： | 1 |
| 4 | 热诱导对8HSE修饰的hTERT启动子转录活性的增强作用显示文摘目的:探讨热诱导对8倍重复串联热休克元件(8HSE)修饰的人端粒酶逆转录酶启动子(h TERTp)转录活性及靶向性的影响。方法:用PCR法从人结肠癌基因组中克隆h TERTp;将单纯的h TERTp或8HSE修饰的h TERTp重组于双荧光素酶报告载体p GL4.2后,分别与内参质粒p GL4.74(含TK启动子)共转染h TERT高表达的SW480细胞株和h TERT低表达的MKN28细胞株,双荧光素酶法检测h TERTp在37℃及43℃下的转录活性。结果:PCR、酶切和DNA测序表明h TERTp克隆、8HSE合成及载体构建成功。37℃下,单纯h TERTp在SW480细胞中的转录活性明显高于MKN28细胞(P<0.05),8HSE对h TERTp转录活性无增强作用,且在SW480细胞中8HSE对h TERT转录活性具有抑制作用;43℃下,单纯h TERTp的转录活性在两种细胞中无明显改变(P>0.05),但与单纯h TERTp比较,8HSE修饰的h TERTp转录活性在SW480细胞中明显增强(P<0.05),而在MKN28细胞中无明显改变(P>0.05)。结论:热诱导对h TERTp转录活性无明显影响,但对8HSE修饰的h TERTp转录活性有明显的增强作用,且该调控元件靶向于h TERT高表达的肿瘤细胞。 | 王孝珑 贺赛 孙学军 周培华 郑见宝 魏光兵 崔飞博 肖宁 张立 禄韶英 | 2015 | 中国普通外科杂志2015，24，5： | 0 |
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