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| 1 | 单根肌纤维法分离培养多裂肌卫星细胞及鉴定显示文摘背景:多裂肌的损伤、萎缩是临床各种腰背痛及功能障碍的主要来源之一,肌卫星细胞是肌肉干细胞,对肌肉的损伤修复起至关重要的作用。但目前尚缺少有关多裂肌卫星细胞分离培养方面的研究。目的:采用单根肌纤维法分离大鼠多裂肌卫星细胞并进行鉴定。方法:在体分离大鼠多裂肌,采用单根肌纤维法获得多裂肌卫星细胞,经反复差速贴壁法纯化,观察其形态变化并绘制细胞增殖曲线;以分化培养基进行诱导,观察其成肌分化情况;并采用免疫荧光法鉴定多裂肌卫星细胞标志蛋白Pax7、Myod、Desmin的表达。结果与结论:(1)单根多裂肌纤维经培养72 h后,可见肌纤维周围有大量长梭形或纺锤形细胞贴壁;(2)采用差速贴壁法纯化后,可见原代细胞呈圆形,高折光性,重新接种后24-48 h可贴壁,其生长呈'S'型;(3)以分化培养基诱导可出现较大肌管;(4)免疫荧光鉴定可见Pax7、Myod在肌卫星细胞的细胞核中为阳性反应,Desmin在细胞质中为阳性反应;(5)结果表明,单根肌纤维法可成功分离大鼠多裂肌卫星细胞,可用于未来多裂肌再生修复方面的研究。 | 刘通 于佳妮 陈玉佩 陈欢 邹德辉 晏珺 卢宗孝 刘悦 张莉 霍则军 | 2018 | 中国组织工程研究2018,22,25: | 4 |
| 2 | 黄河鲤肌肉发育关键因子的多克隆抗体制备及验证显示文摘目前,水产养殖动物肌肉发育的研究多集中于转录水平,而蛋白质水平的研究较少,这种局限性制约了对水产养殖动物肌肉发育及生长的深入研究。本研究以黄河鲤白肌为原材料,采用原核表达的技术获得含抗原决定簇的配对盒转录因子7(Pax7)、肌肉转录调节因子(MyoD)、肌细胞生成素(MyoG)和生肌调节因子4(MRF4)4种融合蛋白,经纯化后免疫新西兰大耳兔,获得相应黄河鲤兔源多克隆抗体。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测效价,并以此抗体为工具,随机选取3尾黄河鲤,检测其白肌中Pax7、MyoD、MyoG和MRF4在蛋白质水平的表达情况。结果显示:4种融合蛋白的分子质量分别为15.60、16.90、16.91和19.35 ku,抗体的效价均达到2.4×106;经检测,黄河鲤白肌中Pax7、MyoD、MyoG和MRF4蛋白分子的免疫荧光信号强度无显著差异(P>0.05)。本研究制备的黄河鲤肌肉发育关键因子的多克隆抗体可为进一步定量分析黄河鲤肌肉发育关键标志性蛋白分子的表达提供有力的工具。 | 运莹豪 宋东蓥 和子杰 米佳丽 王璐明 聂国兴 | 2022 | 动物营养学报2022,34,3: | 0 |
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