|
|
|
题名
|
作者
|
年代
|
出处
|
被引量
|
| 1 | 新生大鼠海马神经元细胞体外培养方法改良研究显示文摘目的探讨改良的新生大鼠海马神经元细胞体外培养方法,为新生儿缺血性脑损伤模型等海马神经元相关疾病研究奠定基础。方法采用本研究自行设计的改良新生大鼠海马神经元细胞的体外培养方法,进行新生大鼠海马神经元细胞的体外培养。判断新生大鼠原代海马神经元细胞体外培养成功的标准为:荧光显微镜下,可见微管相关蛋白(MAP)2在海马神经元细胞体和树突中表达。该改良方法具体为:1以L-多聚赖氨酸和鼠尾胶原作为神经元细胞体外培养的生长基质,分离出生24h内新生SD大鼠海马结构。将其运用单一胰蛋白酶水浴振荡消化后,吹打成细胞悬液,将海马神经元细胞以适当的密度种植于含10%胎牛血清DMEM培养基中,贴壁培养4h后,更换为Neurobasal维持培养基继续培养,以后每3d更换1/2培养液。2采用抗MAP2-5-异硫氰酸荧光素(anti-MAP2-FITC)免疫荧光法,对所获得的海马神经元细胞进行鉴定。结果 1新生大鼠海马神经元细胞的体外培养结果显示,新生大鼠海马神经元细胞于培养30min时,大部分细胞贴壁生长,培养2h后,细胞贴壁明显,少数细胞开始长出突起。于培养5d后,神经元突起进一步增多,并形成神经细胞网络,培养7d后,神经元细胞分化更加成熟,神经元细胞之间的突起联系更加紧密,可见密集的神经细胞网络。海马神经元细胞体外培养至第21天后,神经元细胞开始退化、变性,细胞体皱缩,残留细胞体痕迹,周围光晕消失,折光性减弱,突起融合而粗大杂乱,神经细胞网络粗大老化。2anti-MAP2-FITC免疫荧光法对所获得的海马神经元细胞进行鉴定的结果显示,在所有细胞中,免疫荧光染色MAP2阳性新生大鼠海马神经元细胞纯度达96.3%。结论通过上述改良方法培养获得的新生大鼠海马神经元细胞生长状态良好,并具有较高的纯度,可为进一步进行新生儿缺血性脑损伤模型等海马神经元相关疾病的研究提供实验条件。 | 郭慧 俞丹 周晖 童煜 王峥 | 2016 | 中华妇幼临床医学杂志(电子版)2016，12，1： | 10 |
| 2 | 胰酶稀释法提取乳鼠原代海马神经元显示文摘目的:优化SD乳鼠海马神经元的提取方法。方法:选用出生24 h内的SD乳鼠,分离双侧海马组织,分别用胰蛋白酶稀释法和未稀释法消化后获得细胞悬液;培养细胞,在培养第7天采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光染色鉴定神经元数量及纯度。结果:胰酶稀释组提取得到的海马神经元结构特征明显,能形成典型的神经细胞网络,90%以上海马神经细胞呈NSE阳性。结论:用稀释胰蛋白酶消化海马组织并配合特定培养条件可获得生长状态良好、纯度高的原代海马神经细胞。 | 康杨婷 王丽琨 伍国锋 | 2019 | 贵州医科大学学报2019，44，1： | 4 |
| 3 | 缺氧缺糖海马神经元模型最佳造模时间的选择显示文摘目的:建立可靠合理的海马神经元缺氧缺糖(OGD)模型。方法:用培养5 d的海马神经元细胞,采用三气培养箱联合EBSS液,进行OGD造模;于培养0.5、1、2及3 h时收集海马神经元细胞,倒置显微镜下观察海马细胞的形态,并采用MTT法通过检测海马细胞的吸光度(OD)值绘制海马神经元OGD损伤时效曲线,筛选海马神经元OGD最佳造模时间。结果:倒置显微镜下可见随着OGD时间的延长,神经元细胞受损越严重,生长状态越差,胞体从正常的饱满圆润,折光性、立体感强,神经元细胞轴突长,形状粗壮,数量多,与树突相互交集呈网络状;细胞贴壁牢固,变成大部分神经元胞体与自身轴突、树突连接断裂,有的胞体,细胞直接从培养板壁上脱落,脱落的细胞堆积在一起;从海马神经元OGD损伤时效曲线可发现前5 d海马神经元生长迅速,第5天到达高峰期,第5~7天为平台期,第8天后活力稍下降;与OGD 0 h(正常)OD值比较,OGD 0.5、1、2及3 h的OD值减低(P<0.05),表明所采用的OGD造模方法是成功的,OGD 2 h时细胞的损伤程度为正常细胞组30%,可作为正式实验OGD模型。结论:三气培养箱联合EBSS液可进行体外OGD造模,最佳的细胞模型为培养2 h。 | 杨辉 鲁利香 肖政华 徐春梅 沈慧 侯琼琼 戴家庆 祁兰兰 | 2017 | 贵州医科大学学报2017，42，7： | 4 |
| 4 | 新生大鼠海马神经元体外氧-糖剥夺再灌注模型的建立显示文摘目的体外培养新生大鼠海马神经元,建立神经元氧-糖剥夺再灌注(OGD/R)模型,为临床进一步研究新生儿缺氧缺血性脑损伤奠定基础。方法以L-多聚赖氨酸和鼠尾胶原作为海马神经元体外培养的生长基质,分离24h内新生SD大鼠海马,胰蛋白酶水浴振荡消化获得单个细胞,采用Neurobasal维持培养基更继续培养。培养7d后将神经元细胞培养基更换为无糖缺血液,置于95%高纯度氮气(N2)三气培养箱内缺氧处理2h。将其取出更换为正常培养基继续培养24h,构建神经元OGD/R模型。然后,采用抗微管相关蛋白2-5-异硫氰酸荧光素(anti-MAP2-FITC)标记神经元,于荧光显微镜下观察建模前与建模后神经元的形态学改变,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测微管相关蛋白(MAP)2阳性细胞存活率,对OGD/R模型进行评价。结果荧光显微镜下观察到正常情况下神经元细胞形态结构完整,树突及轴突舒展,交织成网状。建模后,神经元突触回缩,细胞崩解,网状结构被破坏。CCK-8检测结果显示,建模后神经元细胞存活率降低。结论此方法体外培养神经元细胞纯度在95%以上;使用无糖神经元细胞缺血液联合高纯度N2培养2h,再更换为正常培养基培养的方法,可成功建立神经元细胞的OGD/R模型。 | 郭慧 俞丹 周晖 童煜 陶于洪 | 2016 | 中华妇幼临床医学杂志(电子版)2016，12，3： | 4 |
| 5 | 多聚赖氨酸在大鼠海马神经元原代培养中工作浓度的研究显示文摘目的优选多聚赖氨酸(poly-D-lysine,PDL)在大鼠海马神经元原代培养中的最佳工作浓度。方法颈椎脱臼处死孕18 d的Wistar大鼠3只,取出胚胎并分离脑组织。迅速分离海马组织,胰酶消化,吹打并以合适浓度(30万/3.5 cm皿)接种于0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、0.75、1、2 mg/m L的PDL工作浓度包被的培养皿中,采用相差显微镜观察神经元形态,同时采用CCK-8试剂盒进行神经元活性检测。结果神经元接种4 h后贴壁,1 d后突起发生,4 d后与周围神经元形成联系,7 d后成熟并形成网状联系。PDL最佳工作浓度范围位于0.25~0.75 mg/m L,神经元在此浓度范围内生长状态及活性最佳。结论通过实验确定了PDL最佳工作浓度,对于神经元培养有重要意义。 | 韩璐 肖凤 张岫美 | 2015 | 中国生化药物杂志2015，35，5： | 3 |
| 6 | 脑缺血再灌注模型大鼠接受跑台运动锻炼海马反义导向分子A的表达显示文摘背景:脑卒中后,运动锻炼对其神经功能的康复具有极其重要的作用,但关于卒中后大鼠运动量的研究鲜有报道。而海马与认知功能密切相关,但大鼠缺血再灌注后海马内反义导向分子A的表达的研究,国内外未见报道。目的:探索运动锻炼对脑缺血再灌注后大鼠缺血侧海马内反义导向分子A表达的影响。方法:将120只SD大鼠随机等分为正常组、假手术组、模型7,14,28 d组,模型7,14,28 d组大鼠采用线栓法制作大鼠右侧脑缺血再灌注模型。各组大鼠各等分为`4个亚组:非运动亚组、低、中、高运动量亚组。低运动量组进行5 m/min,5 min;7 m/min,5 min;9 m/min,20 min跑台训练;中运动量组进行8 m/min,5 min;10 m/min,5 min;13 m/min,20 min跑台训练;高运动量组进行8 m/min,5 min;11 m/min,5 min;20 m/min,20 min跑台训练。结果与结论:非运动时,模型7 d组大鼠缺血侧海马反义导向分子A m RNA和蛋白表达水平最高,且反义导向分子A相对表达水平随时间延长而逐渐降低。与非运动相比,模型14,28 d组大鼠中运动量时缺血侧海马反义导向分子A m RNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05),而高运动量海马反义导向分子A m RNA和蛋白表达水平表达增加。提示中运动量锻炼可以降低脑缺血再灌注大鼠患侧海马反义导向分子A的表达。 | 郭振委 秦新月 张广慧 | 2015 | 中国组织工程研究2015，19，5： | 2 |
| 7 | 邻苯二甲酸二丁酯对原代培养海马神经元的毒性及机制显示文摘目的本研究探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)暴露对原代培养海马神经元的神经毒性及可能机制。方法海马神经元原代培养4 d后将海马神经元暴露在含有终浓度为0.0(对照)、1 g/LDBP的培养基中,选取染毒24、48、96 h 3个时相点,免疫荧光及透射电子显微镜下观察DBP染毒后海马神经元轴突及超微结构的形态变化;膜片钳测定海马神经元的动作电位;cck-8检测DBP染毒后海马神经元活性。Western blot测定脑源性神经营养因子(BDNF)、神经肽Y(NPY)、雌激素受体β(ERβ)核酸及蛋白的表达情况。高效液相色谱串联质谱检测神经递质GABA的释放。结果DBP染毒96 h后神经元网络稀疏、轴突长度变短(P<0.01),电镜下细胞核呈圆形,染色质聚集,细胞质空泡化;膜片钳测定发现DBP染毒96 h后细胞出现去极化漂移、放电频率增加(P<0.01);cck-8检测发现DBP染毒24、48、96 h的细胞活性均低于同时间点正常对照组(P<0.01)。DBP染毒48、96 h的ERβ、BDNF、NPY蛋白表达显著低于对照组(P<0.05)。DBP染毒96 h后神经递质GABA的释放显著低于对照组(P<0.05)。结论DBP染毒后可导致海马神经细胞形态受损,并导致功能改变,这可能与神经递质GABA参与的ERβ-BDNF-NPY信号通道受阻相关。 | 李洋 李秀娟 谢明丹 程莉 陈恒胜 孙红 蒋莉 | 2020 | 南方医科大学学报2020，40，2： | 2 |
您所在的机构暂未开通此部分的功能，请联系管理员