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| 1 | 介导两种半纤维素酶分泌表达的信号肽比较显示文摘木聚糖酶和甘露聚糖酶是两种主要的半纤维素酶,广泛应用于诸多领域。选择了3种毕赤酵母内源信号肽Scw11、Dse4和Exg1,以α-factor为参照,分别在毕赤酵母X33中用于表达实验室前期获得的耐热木聚糖酶DSB和耐热甘露聚糖酶Man A,选择适合DSB和Man A表达的信号肽以提高胞外酶活水平。结果表明不同信号肽引导的两种半纤维素酶的酶活水平相差较大:对DSB(分子量为23k Da),α-factor介导的表达效率明显优于其它3种信号肽;但对Man A(分子量为30k Da),Dse4和α-factor介导的表达效率相当且明显优于Scw11和Exg1。因此在X33中表达DSB时应选用α-factor,而表达Man A时应选用Dse4或α-factor。此外胞内酶活的结果显示α-factor介导的DSB和Man A重组菌胞内滞留酶活明显高于其它信号肽,而分子量为30k Da的Man A的滞留酶活又明显高于分子量为23k Da的DSB,因此在表达Man A蛋白时,选用其它的信号肽,如Dse4,会减少外源蛋白在胞内的滞留从而在一定程度上提高外源蛋白的分泌量。因此为毕赤酵母表达系统鉴定更多可用的信号肽并筛选到针对目的蛋白的最优信号肽奠定了一定的基础。 | 杨青 汪斌 王亚伟 张华山 熊海容 张莉 | 2017 | 中国生物工程杂志2017，37，8： | 5 |
| 2 | 一株全基因合成耐热甘露聚糖酶的表达及酶学性质分析显示文摘根据已知耐热甘露聚糖酶ManAd3氨基酸序列与毕赤酵母密码子使用偏爱性,设计并合成了甘露聚糖酶ManA全基因(Accession No.KJ806637),与表达载体pPIC9k重组后,转化毕赤酵母GS115,筛选获得重组菌株ManA-GS115。该重组菌株发酵产物经SDS-PAGE鉴定,其中甘露聚糖酶ManA含量达到电泳纯级别,分子量大小约为30 kDa。其酶学性质检测结果显示该酶最适反应温度为75℃,最适反应pH为6.0,比活力高达3200 IU/mg,并且在75℃下处理30 min仍能维持90%以上相对酶活力。该甘露聚糖酶ManA表达量较高,在偏酸性环境下仍能够维持较高的相对酶活力,且热稳定性显著,可广泛应用于食品、酿造、饲料、纺织和医药等工业领域。 | 张巍 王亚伟 陈丰 周樱 熊海容 | 2014 | 中国生物工程杂志2014，34，8： | 5 |
| 3 | 耐热真菌产木聚糖酶的固体发酵条件显示文摘对嗜热真菌(Thermomyces lanuginosus)DSM 10635的固体培养基进行改良。设计的间歇通气的培养装置,简化掉补水操作后,简化了操作并降低了培养基成本,单瓶玉米芯干粉量为120 g/L,增大了培养瓶的利用率,第5天菌丝已基本充满整个培养体系,同时单批木聚糖酶活力最高为53 710 IU/g。 | 陈功 张巍 李思佳 熊海容 | 2014 | 湖北农业科学2014，53，10： | 0 |
| 4 | 钙离子对木聚糖酶Xyn10A热稳定性的影响显示文摘木聚糖酶广泛应用于食品、饲料、纺织、能源等领域。在生产过程中木聚糖酶的热稳定性较为重要,它直接影响酶的反应温度及使用效率。添加Ca^(2+)能够显著提高来源于Thermotoga thermarum DSM 5069的木聚糖酶Xyn10A在高温(85℃)条件下的热稳定性。为解析Xyn10A酶蛋白中的Ca^(2+)结合区域及热稳定性机制,笔者采用蛋白质结构模拟和定点突变技术以确定该结合区域,并分析其对于酶热稳定性的影响机制。酶蛋白的建模和结构比对结果表明,GH10家族木聚糖酶的结构保守性远大于其序列保守性;木聚糖酶Xyn10A中局部环区(712IYRDNATKYEIPP724)涉及Ca^(2+)的结合功能,同时其热稳定性依赖于该环区与Ca^(2+)之间的亲和力。对该环区的定点突变和删除突变导致Xyn10A无法有效地结合Ca^(2+)。Ca^(2+)可与酶蛋白中的(712IYRDNATKYEIPP724)环区形成配位键,显著降低Xyn10A酶催化结构域的柔性和自由度,使Xyn10A酶能够在高温下保持优良的热稳定性,进而有效地发挥其高温催化水解木聚糖的能力。 | 陈秀霞 王亮亮 张瑜 李迅 王飞 | 2017 | 林业工程学报2017，2，3： | 0 |
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