| 1 | MiR-384对HFFA诱导的Hepa1-6细胞sirt3/FOX01信号通路的影响显示文摘目的观察MiR-384对HFFA诱导的Hepa1-6细胞sirt3/FOX01信号通路的影响。方法取Hepa1-6细胞,加入OA和PA储存液,使两者终浓度分别为1 mmol/L和0.5 mmol/L,培养24 h,建立非酒精性脂肪性肝炎体外细胞模型。测定肝细胞内活性氧水平评估模型建立的情况。分别以miR-384模拟物、miR-ctrl、miR-384抑制剂、miR-384抑制剂-ctrl、沉默信息调节因子3(Sirt3)或si-ctrl转染细胞48 h。使用FCM测定各组细胞ROS水平,采用Western blot法检测各组细胞sirt3、FOX01及抗氧化蛋白锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和抗氧化蛋白过氧化氢酶(CAT)表达,采用专用试剂盒检测SOD和CAT活性。结果与正常组(0.66±0.01)比,miR-384模拟物组和sisirt3组细胞内活性氧(ROS)水平显著升高[分别为(37.3±1.13)和(10.4±0.36),P<0.01];与HFFA组(29.4±0.98)比,HFFA/miR-384抑制剂组细胞ROS水平显著降低[(12.8±0.41),P<0.01];与正常组(0.75±0.04)Hepa1-6细胞sirt3蛋白表达水平比,HFFA组显著降低[(0.23±0.01),P<0.01];与HFFA组比,HFFA/sirt3组显著增加[(0.83±0.03),P<0.01];与HFFA/sirt3组比,HFFA/sirt3/miR-384组显著降低[(0.46±0.02),P<0.01];与对照组比,miR-384模拟物组Hepa1-6细胞sirt3蛋白、Forkhead转录因子O亚家族(FOXO)成员FOX01蛋白表达显著减少[分别为(0.2±0.01)和(0.3±0.01),P<0.01],而CAT和MnSOD表达显著增加[分别为(2.3±0.05)和(2.4±0.06),P<0.01];与HFFA组比,HFFA/miR-384抑制剂组Hepa1-6细胞sirt3蛋白和FOX01蛋白表达显著增加[分别为(0.5±0.02)和(0.7±0.01),P<0.01],MnSOD和CAT表达水平显著降低[分别为(1.6±0.04)和(2.0±0.03),P<0.01];与NAFLD组SOD(327±3.45)和CAT(386±4.03)活性比,正常组SOD和CAT[分别为(425±5.49)和(512±6.04),P<0.01]和miR-384抑制剂组SOD和CAT活性[分别为(406±4.79)和(447±5.38),P<0.01]显著升高。结论 miR-384表达可导致HFFA诱导的Hepa1-6细胞氧化损伤加重,部分可能是通过抑制sirt3/FOX01途径实现的。 | 麦静愔 陈天阳 平键 成扬 陈建杰 | 2018 | 实用肝脏病杂志2018，21，6： | 3 |
| 2 | 猪去乙酰化酶SIRT3的克隆及表达显示文摘本试验旨在原核表达猪去乙酰化酶SIRT3,并初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用RT-PCR扩增包含SIRT3的完整编码序列;通过Ω-PCR,将SIRT3完整编码序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达和亲和层析纯化;经免疫印迹分析初步评价SIRT3的抗原性和特异性。重组原核表达质粒pET28aSIRT3经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约39ku,能被相关抗体识别。结果表明,本试验成功在大肠杆菌中表达猪去乙酰化酶SIRT3,为对其进行进一步研究奠定了基础。 | 王候光 马苗鹏 黄魁英 李华周 明飞平 王伟芳 夏枫耿 罗梦晓 杨军 蔡海明 施巨清 黄朝远 楚品品 董建明 朱红霞 张玲华 | 2014 | 中国畜牧兽医2014，41，5： | 3 |
| 3 | 下调miR-421靶向Sirt3调控HepG2肝癌细胞生长和侵袭的机制研究显示文摘目的探讨下调miR-421靶向Sirt3调控肝癌细胞生长和侵袭的机制。方法 RT-PCR方法测定肝癌细胞和正常肝细胞中miR-421表达变化。在肝癌细胞中转染miR-421 inhibitor,MTT测定细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达变化。在线靶基因预测软件发现Sirt3可能是miR-421的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌细胞中共转染miR-421 inhibitor、Sirt3 siRNA,利用上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移能力和 MMP-9 、MMP-2蛋白表达水平。结果 miR-421在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。miR-421 inhibitor转染后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达减少。Sirt3受到miR-421的靶向负调控作用。Sirt3 siRNA 能够逆转miR-421 inhibitor对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和MMP-9、MMP-2表达的抑制作用。结论下调miR-421靶向Sirt3抑制HepG2肝癌细胞生长和侵袭。 | 张寅斌 陈银溪 马宇光 刘棣 梁亮 王梦 孙诗雨 张淑群 | 2019 | 胃肠病学和肝病学杂志2019，28，8： | 1 |
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