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| 1 | β-1,4-葡聚糖内切酶基因在大肠杆菌中分泌表达显示文摘采用重叠延伸PCR合成技术将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)分泌蛋白基因序列usp45(81 bp)和瑞氏木霉(Trichoderma reesei)β-1,4-葡聚糖内切酶成熟蛋白序列egl3(657 bp)连接成融合基因usp45-egl3,构建了分泌型重组质粒pMG36e-usp45-egl3及重组大肠杆菌E.coli DH5α/pMG36e-usp45-egl3。分析重组大肠杆菌的表达效果及表达产物降解纤维素的能力。结果表明,重组大肠杆菌DH5α/pMG36e-usp45-egl3经14 h培养能分泌酶活为226 mU/mL的β-1,4-葡聚糖内切酶,并有效地降解了羧甲基纤维素钠。其中分泌的β-1,4-葡聚糖内切酶降解羧甲基纤维素钠生成还原糖的速率为2.35 mg/(h·mL)。 | 李湘玉 刘秦华 李君风 白晰 T. Desta 王思然 董志浩 白云峰 邵涛 | 2018 | 食品与生物技术学报2018，37，3： | 4 |
| 2 | 微生物酶高效异源表达策略的最新研究进展显示文摘酶是一种高专一性的生物催化剂,在化工、农业、医药、食品、纺织、饲料等领域具有广泛应用。常见的酶表达宿主包括大肠杆菌、芽孢杆菌、丝状真菌、酵母、乳酸菌等。不同类型的表达宿主具有不同的特点,如细菌宿主可用来快速地过量表达原核来源的酶,但真核来源的大分子蛋白由于翻译后修饰的原因往往不能在细菌表达系统中正确表达,仅可以在真核表达宿主中正确表达。近年来利用不同表达宿主实现工业酶的高效异源表达取得了很大进展。本文系统总结了在不同表达宿主中实现工业酶高效异源表达策略的最新研究进展,并对工业酶高效异源表达技术的发展趋势进行了展望。 | 杨海泉 刘龙 李江华 堵国成 陈坚 | 2013 | 食品科学2013，34，9： | 3 |
| 3 | β-1,4-葡聚糖内切酶egl3基因在乳酸乳球菌中分泌表达的研究显示文摘研究采用重叠延伸PCR合成技术将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)分泌蛋白基因序列usp45(81bp)和瑞氏木霉(Trichoderma reesei)β-1,4-葡聚糖内切酶成熟蛋白序列egl3(657bp)连接成融合基因usp45-egl3,构建了分泌型重组质粒pMG36eusp45-egl3及重组乳酸乳球菌L.lactis subsp.lactis MG1363/pMG36e-usp45-egl3,分析了重组乳酸乳球菌表达β-1,4-葡聚糖内切酶的效果及其降解滤纸和小麦秸秆的能力。结果表明,重组乳酸乳球菌L.lactis subsp.lactis MG1363/pMG36e-usp45-egl3经28h培养能胞外分泌酶活为1 016U/L的β-1,4-葡聚糖内切酶,有效地降解了羧甲基纤维素钠。在30℃恒温培养10d时,重组乳酸乳球菌L.lactis subsp.lactis MG1363/pMG36e-usp45-egl3降解滤纸和小麦秸秆为其提供发酵底物,分别产生乳酸2.55g/L和6.95g/L,pH分别降至5.10和4.84,干物质降解率分别为4.22%和29.36%。 | 刘秦华 邵涛 董志浩 李湘玉 | 2017 | 中国科技论文2017，12，6： | 1 |
| 4 | 表达堆型艾美耳球虫3-1E蛋白的三种重组乳酸乳球菌构建与鉴定显示文摘为探索堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)表面抗原3-1E基因在乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中的不同表达形式,首先通过PCR扩增3-1E目的基因片段,克隆入pTX8048载体中,构建胞内表达质粒p TX8048-3-1E;将乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)信号肽(SP)与3-1E基因片段融合(SP-Δ3-1E),并克隆入pTX8048中,构建分泌表达质粒pTX8048-SP-Δ3-1E;将化脓性链球菌M6蛋白细胞壁锚定序列(Cell wall anchor,CWA)克隆入pTX8048-SP-Δ3-1E中的Δ3-1E下游(去除Δ3-1E终止密码子,即NAΔ3-1E),构建表面表达质粒pTX8048-SP-NAΔ3-1E-CWA;将三种表达载体电转化到乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中,构建三种乳酸乳球菌L.lactis NZ9000/pTX8048-3-1E(胞内表达菌)、L.lactis NZ9000/pTX8048-SP-Δ3-1E(分泌表达菌)及L.lactis NZ9000/pTX8048-SP-NAΔ3-1E-CWA(表面表达),通过Western blot来检测3-1E目的蛋白在三种阳性乳酸乳球菌中的表达。结果表明,构建的三种重组乳酸乳球菌均可表达目的蛋白。研究结果为进一步评估重组乳酸乳球菌的抗球虫免疫保护作用及后续非抗性标记乳酸菌体系建立奠定基础。 | 张丽丽 马德星 高铭扬 王芬 张跃 王典 黄宇晨 李健 | 2016 | 中国家禽2016，38，22： | 0 |
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