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| 1 | 荔枝霜疫霉巢式PCR和LAMP检测方法的建立显示文摘由荔枝霜疫霉(Peronophythora litchii)引起的荔枝霜疫霉病是荔枝(Litchi chinensis)生产上的重要病害,建立霜疫霉快速准确检测方法,对于该病的早期诊断和及时防控至关重要。本研究以荔枝霜疫霉三磷酸鸟苷(GTP)结合蛋白基因(GTP-binding protein gene,Ypt1)为靶序列,设计特异性引物,建立了巢式PCR和环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)两种检测方法,并进行特异性和灵敏度验证。特异性检测表明,只有不同来源的21个荔枝霜疫霉菌株经PCR扩增获得249 bp的特异性条带,同时,在钙黄绿素指示剂的作用下,LAMP检测显示绿色,且扩增产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳出现特有的梯形条带,而其他13种不同卵菌近缘种及8种常见病原真菌42个菌株均未观察到这些现象。灵敏度检测显示,将特异引物Pv YF1/Pv YR1与疫霉属Ypt1通用引物Yph1F/Yph2R进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达100 fg/25μL,较常规PCR提高1 000倍,而LAMP方法检测灵敏度是巢式PCR的10倍。本研究分别采用常规PCR、巢式PCR和LAMP方法对采集自福建省荔枝霜疫霉病典型症状及可疑症状的荔枝叶片或果实进行检测,并用传统分离方法进行验证。结果表明,在漳州采集的30份样品中,常规PCR、巢式PCR和LAMP方法的阳性检出率分别为17/22(77.3%)、20/22(90.9%)和21/22(95.5%);在莆田采集的25份样品中,常规PCR、巢式PCR和LAMP方法的阳性检出率分别为15/17(88.2%)、16/17(94.1%)、17/17(100%)。可见LAMP方法明显提高了检测效率,并且具有检测程序便捷,所需设备简单和肉眼能判断结果的优势,适合基层部门及田间荔枝霜疫霉快速检测。 | 李本金 刘裴清 刘小丽 黄宏臻 翁启勇 陈庆河 | 2016 | 农业生物技术学报2016，24，6： | 11 |
| 2 | 内蒙古乌兰察布市马铃薯致病疫霉分离鉴定及特征分析显示文摘内蒙古乌兰察布市是我国重要的马铃薯产地,为研究该地区的晚疫病病原菌发生情况及特性,在该地田间采集患病马铃薯叶片并分离纯化致病疫霉菌株,进行分子鉴定、交配型鉴定、生长特性分析、耐药性检测和毒力测定。结果显示,从该地6个区分离到15株菌株,分离得率为41.7%,且分离到的菌株以菌丝生长速率一般型为主,占比73.00%。多数菌株生长耐受温度范围在10℃~24℃、26℃之间。该地以弱致病型性菌株占比最高,其次是一般型菌株。该地鉴定到13株A1交配型菌株,2株A2交配型菌株。针对精甲霜锰锌和银法利的耐药性,对精甲霜锰锌的高抗型菌株占比86.67%,对银法利的高抗型菌株占比60.00%,以高抗型菌株占比最高。分离到的菌株弱致病性菌株比例最高,占比达46.67%,强致病性菌株比例最少,占比20.00%。研究揭示了乌兰察布市致病疫霉的特征特性,为马铃薯晚疫病的防治提供了思路。 | 穆青慧 林睿 周娜 白薇 | 2023 | 内蒙古农业大学学报(自然科学版)2023，44，1： | 0 |
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