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| 1 | 鹅细小病毒结构蛋白VP3优势抗原表位区的原核表达及其表达产物免疫原性的研究显示文摘为了构建鹅细小病毒亚单位疫苗候选菌株,通过软件优化分析预测鹅细小病毒结构蛋白VP3的抗原表位分布,并设计抗原表位富集区的引物,PCR扩增获得目的片段,双酶切定向连接于pET-30a表达载体,转化BL21表达菌株诱导表达,获得目的蛋白,使用该蛋白免疫SPF鸡,制备抗血清,使用鹅胚成纤维细胞原代细胞进行中和效价的测定。结果显示,成功构建了原核表达载体pET-30a-VP3,通过条件优化蛋白以可溶性形式存在,免疫制备的抗血清中和效价能够达到-2.608。结论:本研究以可溶性形式成功表达了鹅细小病毒结构蛋白VP3优势抗原表位区,且该蛋白作为免疫原具有很好的产生中和抗体的能力。 | 李书光 吴清民 肖跃强 李峰 张娜 李玲 杨立芳 沈志强 | 2015 | 中国兽医科学2015，45，10： | 4 |
| 2 | 拟态弧菌VMH蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备显示文摘目的实现拟态弧菌热不稳定性溶血素(VMH)的原核表达,制备兔抗VMH蛋白的多克隆抗体。方法根据GenBank上已有的拟态弧菌vmh基因序列,设计并合成引物,通过PCR方法扩增vmh基因。PCR纯化产物酶切后,定向插入到PET-32a表达载体构建重组表达质粒PET-32a-vmh。重组表达质粒转化至E.coli Rosetta感受态细胞,在IPTG诱导下进行VMH蛋白表达。SDS-PAGE分析重组VMH蛋白(rVMH)的表达形式,并分别采用兔血平板扩散法和Western blot检测其溶血活性和免疫反应性。用纯化的rVMH蛋白免疫新西兰大白兔,3次免疫后采集免疫血清,采用饱和硫酸铵分级沉淀结合亲和层析法纯化多克隆抗体,并检测其纯度与效价。结果重组表达质粒PET-32a-vmh诱导表达后,经SDS-PAGE分析发现分子量约为77.8kDa的rVMH蛋白主要以包涵体形式表达,该蛋白经变性复性后具有溶血活性和免疫反应性。兔抗rVMH蛋白的多克隆抗体经纯化后,其纯度达95%,ELISA效价为1∶26843545600,琼扩效价为1∶32。结论成功制备了rVMH蛋白及其多克隆抗体,为进一步采用噬菌体肽库筛选技术鉴定VMH蛋白表位提供了物质基础。 | 肖宁 曹际 孔令严 周昊 陶会竹 陶丽寒 李槿年 | 2016 | 中国微生态学杂志2016，28，7： | 2 |
| 3 | 我国鹅细小病毒免疫学研究进展显示文摘鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)是小鹅瘟的病原体,GPV是一种单股的DNA病毒,从分类学角度讲GPV属于细小病毒科,细小病毒亚科。小鹅瘟是由GPV引起的一种高度接触性急性或亚急性败血性的传染病,肠道栓塞为小鹅瘟特征性病变,通过排泄物和代谢分泌物排毒,传播并且扩散到空气环境中,饲料和水极其受到污染,经消化道引起本病迅速传播,小鹅瘟具有较高的死亡率和较强的传染性, | 杜翔宇 李温明 胡振林 张甜甜 胡桂学 董浩 | 2016 | 中国兽医杂志2016，52，7： | 2 |
| 4 | 基于细菌展示技术的高通量抗原表位筛选方法的建立显示文摘目的:本研究旨在利用细菌表面展示技术结合流式细胞术建立一种快速直观的抗原表位的新方法。方法:本研究以传染性法氏囊病毒结构蛋白VP2作为目标蛋白,对该方法的可行性进行检测。将VP2基因分为连续不重叠的5个基因片段(V1~V5)。将各段基因分别克隆至细菌展示载体pAPEx中.转化大肠杆菌DH5a,利用IPTG诱导使蛋白片段锚定表达于大肠杆菌细胞间质侧的内膜上,利用溶菌酶破除细菌外膜(原生质球制备),使蛋白片段暴露于原生质球表面。将该原生质球先后与传染性法氏囊病毒多克隆抗体和FITC标记的兔抗鸡抗体进行孵育,利用流式细胞仪(Flowcytometer,FC)检测原生质球的荧光信号强度。结果:FC结果显示,除V2片段外其余片段均有很强的荧光信号,其荧光强度为V3最强,Vl、V4、V5其次。该结果说明V1、V3、V4、V5段存在抗原表位,V2段中无表位。为验证Fc结果,本研究利用传统方法对各基因片段进行表达、纯化及Westernblot鉴定,结果显示V3与多抗的结合能力最强,v2段无阳性反应,与FC结果相符。此外,本研究利用抗原表位分析软件对各蛋白片段潜在抗原表位进行预测,其结果与FC结果相一致。结论:本研究利用Fc对抗原表位筛选过程进行实时监测,通过荧光信号强弱即可判断抗原表位是否存在及强弱,与传统抗原表位筛选方法相比,节省了时间提高了效率。利用该方法可以快速地筛选出优势表位,对于流行病病原的基础研究及疫苗的研制具有重意义。 | 郭茉 徐黎明 周兵 尹杰超 任桂萍 李德山 | 2014 | 中国免疫学杂志2014，30，3： | 1 |
| 5 | 乙肝病毒核心蛋白病毒样颗粒作为载体在表位疫苗中的应用显示文摘乙型肝炎病毒核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)C基因编码的病毒蛋白,是HBV的衣壳蛋白,主要存在于HBV核衣壳表面。乙肝病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)来源于HBcAg,由183或185个氨基酸组成。由于HBc本身具有高度的免疫原性,并且可携带自身或外源病原体的抗原/表位在体外自组装成病毒样颗粒,20世纪80年代开始HBc就被用于疫苗载体的研究。现对HBc近年来作为载体在表位疫苗中的应用作一概述。 | 曹惠 胡四海 | 2019 | 微生物学免疫学进展2019，47，6： | 1 |
| 6 | 人类红细胞RhD抗原的T-B细胞联合表位的生物信息学预测显示文摘目的研究红细胞血型系统RhD抗原的蛋白质结构,预测该抗原的T-B细胞联合表位,准确定位T-B联合表位在抗原表面的分布情况。方法采用各种预测软件和在线预测工具,根据RhD抗原的理化性质预测其蛋白质二级结构以及T、B细胞表位,获得T-B联合表位所在的氨基酸残基的位置。结果红细胞RhD抗原有T-B联合表位2个,氨基酸残基所在的位置:36-54,66-82。结论经过生物信息学方法计算获得的2个表位可以作为确定人类红细胞RhD抗原潜在T-B联合优势表位的参考。 | 李玉娇 宋小川 许洁 居敏 杨妍 刘斌 颜芝 郭新红 | 2017 | 新疆医科大学学报2017，40，8： | 0 |
| 7 | Prokaryotic Expression and Immunogenicity of Dominant Epitope Region of Goose Parvovirus Structural Protein VP3显示文摘[Objective] The paper was to develop a subunit vaccine candidate for prevention and control of goose parvovirus infection. [Method]Based on the prokaryotic expression system, the antigenic epitopes and locations of the structural protein VP3 were predicted by software analysis,and the region displaying a large portion of antigenic epitopes was amplified by PCR. The target VP3 DNA fragment was inserted into pET-30 a-VP3 vector, was transformed into Escherichia coli BL21 competent cells for protein expression and animal test. The SPF chickens were immunized with the recombinant protein and the antisera were collected for neutralization test by using a goose embryo fibroblast. [Result] The recombinant plasmid was constructed, and the target region of VP3 protein was expressed efficiently in a soluble form. The neutralizing titers of antisera could reach up to-2.608. [Conclusion] The target region displaying a large portion of antigenic epitopes of the structural protein VP3 could be expressed efficiently in soluble form, and the expressed protein could induce neutralizing antibodies in SFP chicken. | Li Shuguang Cheng Likun Li Feng Zhang Na Zhao Jialei Yang Lifang Shen Zhiqiang | 2018 | Animal Husbandry and Feed Science2018，10，1： | 0 |
| 8 | 水貂CDV-MEV二联多表位抗原的设计显示文摘犬瘟热和水貂病毒性肠炎是在毛皮动物养殖业中广泛流行的两类急性、接触性传染病,病原分别是犬瘟热病毒(CDV)和水貂肠炎病毒(MEV)。疫苗接种是主要的预防手段。但当前市售MEV灭活苗更新速度慢、灭活剂致癌,不能诱导细胞免疫反应;CDV弱毒苗易受母源抗体干扰,存在一过性免疫抑制、返祖散毒等问题。 | 卞大伟 | 2018 | 黑龙江畜牧兽医2018，，5： | 0 |
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