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| 1 | Rapid conversion of human ESCs into mouse ESC-like pluripotent state by optimizing culture conditions显示文摘The pluripotent state between human and mouse embryonic stem cells is different.Pluripotent state of human embryonic stem cells(ESCs)is believed to be primed and is similar with that of mouse epiblast stem cells(EpiSCs),which is different from the naïve state of mouse ESCs.Human ESCs could be converted into a naïve state through exogenous expression of defined transcription factors(Hanna et al.,2010).Here we report a rapid conversion of human ESCs to mouse ESC-like naïve states only by modifying the culture conditions.These converted human ESCs,which we called mhESCs(mouse ESC-like human ESCs),have normal karyotype,allow single cell passage,exhibit domed morphology like mouse ESCs and express some pluripotent markers similar with mouse ESCs.Thus the rapid conversion established a naïve pluripotency in human ESCs like mouse ESCs,and provided a new model to study the regulation of pluripotency. | Qi Gu Jie Hao Xiao-yang Zhao Wei Li Lei Liu Liu Wang Zhong-hua Liu Qi Zhou | 2012 | Protein & Cell2012，3，1： | 6 |
| 2 | 疾病特异性诱导多能干细胞:神经退行性疾病研究和临床治疗的有力工具显示文摘神经退行性疾病是一组由慢性进行性中枢神经系统退行性变性而产生的疾病总称。多数神经退行性疾病进展缓慢,发病机制不明,迄今仍无有效治疗措施。随着各种人类疾病特异性诱导多能干细胞(i PSC)的建立,利用患者自身细胞诱导形成的i PSC进行神经退行性疾病的研究更加切实可行。目前疾病特异性i PSC在神经退行性疾病模型建立、药物筛选及细胞移植等方面的研究取得了很大进展,对揭示神经退行性疾病的发病机制,并推动早期诊断及临床治疗的发展具有重要的理论意义和极大的应用潜力。本文重点介绍i PSC定向诱导神经细胞在帕金森病、阿尔茨海默病、脊髓性肌萎缩症、肌萎缩性脊髓侧索硬化症和舞蹈病等5种常见神经退行性病中的建模、药物筛选及临床治疗方面的研究进展,同时对该领域当前面临的问题进行分析和评价。 | 蒋宁 周文霞 张永祥 | 2016 | 国际药学研究杂志2016，43，2： | 4 |
| 3 | 动物转基因技术在转基因牛中的研究进展显示文摘本研究综述了目前应用于转基因牛中原核显微注射法、体细胞克隆法、病毒载体法等传统动物转基因技术以及具有应用前景的ZFN技术、TALEN技术和iPS技术等。概述了20年来国内外转基因牛重要的研究进展,并就目前转基因牛在乳腺生物反应器、抗病育种、品种改良主要3个方面的应用进行了介绍。在此基础上,就目前转基因牛育种中存在的问题及今后发展趋势进行了讨论,以促进转基因牛技术的发展。 | 张兆顺 成功 昝林森 | 2012 | 中国农学通报2012，28，20： | 3 |
| 4 | 人真皮成纤维细胞诱导分化研究显示文摘目的体外分离培养人包皮成纤维细胞(HFF),探讨其成骨、成脂、成软骨分化潜能,为骨创伤或其他修复治疗提供新的种子细胞来源。方法采用机械法结合酶消化法分离、培养HFF。取第3代细胞用免疫细胞化学法检测其波形蛋白(Vimentin)和角蛋白19(CK19)的表达。通过向成骨、成脂、成软骨细胞诱导分化(诱导培养基根据说明书配制),鉴定其多向分化潜能。结果原代细胞24h内完全贴壁,细胞形态不规则,多为圆形或多角形,传代后细胞形态均一,基本为长梭形,鱼群样、漩涡样生长。免疫细胞化学结果显示该细胞表达Vimentin,不表达CK19,经诱导可以向成骨、成脂、软骨细胞方向分化。结论 HFF在特定条件能多向分化,其本身也参与骨折愈合的全过程,加之来源方便,增殖能力强,有望为骨折或较大骨缺损患者修复治疗及组织工程学提供理想种子细胞。 | 郭常敏 王达利 魏在荣 | 2014 | 重庆医学2014，43，2： | 2 |
| 5 | 真皮成纤维细胞多向分化潜能的研究进展显示文摘真皮成纤维细胞起源于胚胎中胚层间质细胞,是构成体内疏松结缔组织的主要细胞成分。以往认为,真皮成纤维细胞在机体发育过程中是分化完全的终末细胞,不具备多向分化潜能,只能作为真皮组织的种子细胞。近年来研究发现,真皮成纤维细胞能够表达间充质干细胞相关标志物,具有多向分化潜能,在特定条件下能够向骨、脂肪、软骨、肌腱、神经以及胰岛等多胚层组织器官分化,可能成为组织器官构建的种子细胞来源。现将真皮成纤维细胞的多向分化潜能研究现状进行综述。 | 马晓飞 朱明 张艳 柴岗 | 2011 | 组织工程与重建外科杂志2011，7，6： | 2 |
| 6 | Hartley豚鼠耳朵成纤维细胞分离培养与鉴定分析显示文摘本文旨在建立快速获取豚鼠耳朵成纤维细胞的方法,为豚鼠体细胞重编程技术提供起始细胞。首先采用0.05%Trypsin-EDTA和Collagenase IV两种消化酶对脱毛后的耳朵组织碎块进行消化;然后对获取的细胞进行体外培养和形态学观察,支原体检测,Vimentin蛋白免疫荧光鉴定,测定细胞生长曲线计算细胞倍增时间;用绿色荧光蛋白的逆转录病毒感染后用流式细胞仪检测感染效率,核型鉴定检测病毒对核型的影响。分离的豚鼠耳朵成纤维细胞为贴壁生长细胞,消化后2~3h即大部分贴壁并基本完全伸展,细胞呈梭形或多角形,胞浆饱满,立体感强,细胞核清晰形态良好,支原体检测阴性。细胞表达成纤维细胞特异性蛋白Vimentin。生长曲线为S形,符合体外培养细胞正常生长增殖规律,细胞倍增时间为24.85h。逆转录病毒感染效率达75.6%,病毒感染后染色体2n=64的细胞占90%,遗传稳定核型正常。本研究提供的体细胞获取方法操作简单,效率高,获取的细胞状态良好,细胞增殖速度快,细胞感染率高,是一种非常合适的豚鼠耳朵成纤维细胞分离手段,为后续进一步研究豚鼠体细胞重编程提供了技术基础。 | 陈瑞平 吴楚漫 周文怡 姜浩东 吴越 彭俊崴 郭惠明 黄焕雷 朱烁基 赵明一 朱平 | 2019 | 激光生物学报2019，28，3： | 2 |
| 7 | A special issue on cell signaling, disease, and stem cells显示文摘 | DangshengLi | 2012 | Cell Research2012，22，1： | 2 |
| 8 | 自体真皮移植配合甲板替代物修复部分甲床缺损的临床研究显示文摘目的探讨自体真皮配合甲板替代物修复手指部分甲床缺损的临床效果。方法回顾性分析2018年7月—2020年1月复旦大学附属金山医院骨科收治因创伤致部分甲床缺损、指骨外露患者14例共15指,男性9例,女性5例;年龄20~58岁,平均37.2岁。刀切伤5例,电锯伤2例,冲压伤3例,碾压伤4例。所有患者行急诊清创后,一期进行取前臂真皮移植,同时配合甲板替代物加压覆盖,修复缺损甲床。供区直接缝合,术后随访观察指甲生长情况。结果1例患者因创面感染于术后5d去除甲板替代物,经换药后创面愈合,因部分皮片坏死,瘢痕愈合,新生指甲不光滑,外形欠佳;余13例14指创面愈合良好,于术后2周拆除缝线及甲板替代物。门诊随访5~16个月,平均10.3个月。患者指甲生长平整光滑,外形对称,未出现指甲与甲床分离现象;未出现患指疼痛、握力或捏持力减退症状。供区全部愈合,术后2周拆除缝合线,留有线性瘢痕。结论应用自体真皮配合甲板替代物修复部分甲床缺损,操作简单,取材方便,费用低廉,临床效果良好。 | 姚喜州 何县委 卜晓凡 张新潮 | 2021 | 创伤外科杂志2021，23，10： | 2 |
| 9 | 大动物多能干细胞建立研究进展显示文摘多能干细胞(pluripotent stem cells,PSCs)是可以无限增殖更新并具有分化为各种组织细胞潜能的一类干细胞系。而其中的iPS细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)的建立更是进一步拉近了干细胞和临床疾病治疗的距离,并且对农业经济发展和动物医学领域具有巨大的潜在应用价值。然而目前干细胞深层次的机制与应用研究主要还是集中在小鼠和人类干细胞上,而对于农牧业与兽医学关系紧密的大动物干细胞的研究主要还在初步建立与应用尝试阶段。而本文通过归纳整理相关文献,简述了胚胎多能干细胞以及诱导多能干细胞在猪、牛、马等大动物中的建立研究现状。 | 才文道力玛 伊敏娜 王希生 神英超 纳日嘎 陶力 格日乐其木格 芒来 | 2020 | 中国实验动物学报2020，28，5： | 2 |
| 10 | 豚鼠胎儿成纤维细胞的分离培养及生物学特性分析显示文摘为建立豚鼠成纤维细胞系,分离培养豚鼠胎儿成纤维细胞,并对其进行细胞活力、生长曲线、细胞周期及基因转染等分析。结果表明,豚鼠胎儿成纤维细胞在10代以内时形态良好,随着传代次数的增加,梭型细胞有拉长趋势,至第20代时梭形明显拉长,单位面积细胞数目大量减少。同时,细胞冻存后复苏贴壁情况良好。EGFP基因转染的成纤维细胞形态特征及生长状态与未转染细胞相似,转基因细胞和未转基因细胞的生长曲线均为S形,符合体外培养细胞正常生长增殖规律。以流式细胞仪分析逆转录病毒介导的EGFP基因转染细胞,可见染色体核型仍为二倍体,说明感染的细胞保持其遗传稳定性。流式细胞仪检测转染后不同时间点收集的病毒液感染的细胞效率,结果显示,病毒转染48h、72h收集病毒液组感染效率分别为16.9%和11.6%,显著高于24h收集病毒液组(0.9%)。 | 吴月红 何承文 宋孚洋 闫琰 刘升 何玉龙 | 2013 | 西北农业学报2013，22，12： | 2 |
| 11 | 四环素调控基因(TetO)诱导重编程的猪体细胞系建立显示文摘建立含有TetO-FUW-OSKM和FUW-M2rtTA的第二代猪(Sus scrofa domesticus)成纤维细胞,使其在添加强力霉素(doxycycline,DOX)而无需再次感染病毒的条件下可以重编程。将慢病毒(Lentiviral)质粒四环素调控基因(TetO)-FUW-OSKM和FUW-M2rtTA同时感染猪胎儿成纤维细胞(porcine embryonic fibroblasts,PEF),在添加DOX的培养条件下,形成诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)。随后,将iPSCs通过形成拟胚体(embryoid body,EB)再分化为成纤维样细胞,即TetO-PEF细胞。TetO-PEF携带TetO-FUW-OSKM和FUW-M2rtTA两个载体,且外源四因子拷贝数一致,在+DOX条件下调控四因子表达,直接驱动细胞重编程。本研究建立了TetO-PEF细胞系,为优化猪iPSCs培养条件提供了新的细胞资源。 | 段安琴 王宁 于童 王华岩 | 2014 | 农业生物技术学报2014，22，9： | 2 |
| 12 | 大家畜诱导多潜能干细胞(iPSCs)研究进展显示文摘向分化的体细胞内导入特定的诱导因子,可将其重编程为诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs),iPSCs同胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)一样具有自我更新并维持未分化状态的能力。iPSCs的出现,有效地解决了ESCs研究领域存在的伦理道德限制和免疫排斥问题。自2006年国际上首次成功获得小鼠(Mus musculus)诱导多潜能干细胞以来,iPSCs研究发展迅猛。从利用病毒载体到普通质粒载体,从导入DNA、RNA和蛋白质,再到利用小分子化合物组合进行体细胞重编程,iPSCs诱导技术正在向多元化发展;同时,研究者们对细胞重编程机理的认识也在加深。与此同时,大家畜iPSCs研究领域也相继获得了猪(Sus scrofa)、牛(Bos taurus)和绵羊(Ovis aries)等动物的iPSCs,并得到了iPSCs嵌合猪和iPSCs嵌合羊。由于猪等大家畜不仅在解剖和生理结构等方面与人相似,还是人类(Homo sapiens)最主要的肉类和奶类等食物来源,关系着人类的健康,因此大家畜iPSCs在临床应用和生产实践上具有重大价值。鉴于此,本文对iPSCs诱导方法、效率、机制和大家畜iPSCs研究现状做一综述。 | 王峰 刘灿 潘传英 | 2014 | 农业生物技术学报2014，22，10： | 2 |
| 13 | 软骨形态发生蛋白1诱导瘢痕成纤维细胞表达软骨表型的实验研究显示文摘目的应用软骨形态发生蛋白1(CDPM1)诱导瘢痕成纤维细胞向软骨细胞分化,探讨其作为烧伤后耳软骨缺损修复的种子细胞的可行性。方法取瘢痕切除术患者的增生性瘢痕组织,提取瘢痕成纤维细胞,CDPM1诱导培养(2%胎牛血清F-12培养液,CDMP1终浓度为100 ng/mL),设阴性、阳性对照组。Image Plus图像软件观察细胞形态变化;免疫荧光、RT-PCR及Western Blot分析诱导前后的软骨相关Ⅰ、Ⅱ型胶原、Sox9、Aggrecan的表达;对第4代细胞行Micromass法培养诱导,HE染色、免疫组织化学染色及Safranine-O染色对诱导结果进行检测。结果诱导后瘢痕成纤维细胞由长梭形向多角形转变,Image Plus软件分析示诱导后细胞长宽比例为(1.48±0.21):1,与诱导前的(7.21±1.54):1相比,差异有统计学意义(P<0.05);与软骨细胞的(1.31±0.13):1相比,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光、RT-PCR、Western Blot结果显示,诱导后瘢痕成纤维表达软骨相关指标Ⅱ型胶原、Sox9、Aggrecan。Micromass诱导后行HE染色显示,诱导后部分细胞出现软骨特征性陷窝结构,免疫组织化学染色显示Ⅱ型胶原阳性染色,Safranine-O染色显示微团块诱导后细胞基质红染。结论瘢痕成纤维细胞在软骨形态发生蛋白1诱导下可以向软骨细胞分化,有望成为烧伤后耳软骨缺损修复的种子细胞。 | 马晓飞 张艳 柴岗 朱明 | 2012 | 组织工程与重建外科杂志2012，8，2： | 1 |
| 14 | 利用piggyBac转座子制备牛成体多能干细胞诱导技术研究显示文摘通过逆转录病毒等媒介表达核转录因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc可将体细胞重编程为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSc)。时至今日,已经报道了小鼠、人、大鼠、猪、羊、马、牛的iPS细胞,但大动物iPS的多能性特别是嵌合体形成和生殖细胞传代还没有得到确认。与逆转录病毒等不同的是,piggyBac转座子转染效率高且无病毒源性、操作简单,可以在转座酶的存在下被安全切除。首次尝试了采用piggyBac转座子携带鼠源Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Rarg和Lrh1 6个核转录因子诱导胎牛成纤维细胞,成功获得牛类iPS细胞,其形态与小鼠胚胎干细胞相似,克隆边界清晰、呈丘状、克隆内细胞致密、核大。RT-PCR与免疫组织化学染色分析均显示牛类iPS细胞表达多能性基因。该类细胞体外诱导分化可形成类胚体EB,且表达3个胚层的基因;体内诱导分化可形成畸胎瘤,苏木精、伊红染色显示瘤体有三胚层的分化。上述结果显示利用piggyBac转座子制备牛多潜能干细胞诱导技术可行,产生的牛类iPS细胞具有潜在多能性。 | 赵丽霞 张金吨 张健 李云霞 苏杰 孙伟 赵高平 戴雁峰 郭继彤 胡树香 WANG Wei LIU Pen-tao 李喜和 | 2013 | 中国生物工程杂志2013，33，2： | 1 |
| 15 | Revolutionize livestock breeding in the future: an animal embryo-stem cell breeding system in a dish显示文摘Meat and milk production needs to increase ~ 70–80% relative to its current levels for satisfying the human needs in 2050.However,it is impossible to achieve such genetic gain by conventional animal breeding systems.Based on recent advances with regard to in vitro induction of germ cell from pluripotent stem cells,herein we propose a novel embryo-stem cell breeding system.Distinct from the conventional breeding system in farm animals that involves selecting and mating individuals,the novel breeding system completes breeding cycles from parental to offspring embryos directly by selecting and mating embryos in a dish.In comparison to the conventional dairy breeding scheme,this system can rapidly achieve 30–40 times more genetic gain by significantly shortening generation interval and enhancing selection intensity.However,several major obstacles must be overcome before we can fully use this system in livestock breeding,which include derivation and mantaince of pluripotent stem cells in domestic animals,as well as in vitro induction of primordial germ cells,and subsequent haploid gametes.Thus,we also discuss the potential efforts needed in solving the obstacles for application this novel system,and elaborate on their groundbreaking potential in livestock breeding.This novel system would provide a revolutionary animal breeding system by offering an unprecedented opportunity for meeting the fast-growing meat and milk demand of humans. | Zhuocheng Hou Lei An Jianyong Han Ye Yuan Dongbao Chen Jianhui Tian | 2019 | Journal of Animal Science and Biotechnology2019，10，1： | 1 |
| 16 | 诱导多潜能干细胞(iPSCs):安全高效的诱导策略显示文摘在分化的体细胞中,导入特定的转录因子能诱导得到诱导多潜能干细胞(induced pluripotentstem cells,iPSCs).iPSCs在细胞形态、生长特性、表面标志物以及畸胎瘤形成等方面与胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)非常相似,而且跟ESCs相比,iPSCs具有避免免疫排斥和不涉及伦理问题的优势,因此iPSCs的临床应用潜力巨大.然而,iPSCs具有成瘤性,而且其诱导效率极低,此二者严重阻碍了iPSCs的临床应用.为解决这两大难题,本综述将主要探讨安全高效的iPS细胞诱导策略,以期为促进其临床应用提供借鉴. | 黄聪 蒋思文 | 2012 | 中国生物化学与分子生物学报2012，28，11： | 1 |
| 17 | Porcine pluripotent stem cells: progress, challenges and prospects显示文摘Pluripotent stem cells(PSCs) are characterized by their capacity for high self-renewal and multiple differentiation potential and include embryonic stem cells, embryonic germ cells and induced PSCs. PSCs provide a very suitable model for the studies of human diseases, drugs screening, regenerative medicine and developmental biology research. Pigs are considered as an ideal model for preclinical development of human xenotransplantation, therapeutic approaches and regenerative medicine because of their size and physiological similarity to humans. However, lack of knowledge about the derivation, characterization and pluripotency mechanisms of porcine PSCs hinders progress in these biotechnologies. In this review, we discuss the latest progress on porcine PSCs generation, evaluation criteria for pluripotency, the scienti?c and technical questions arising from these studies. We also introduce our perspectives on porcine PSC research, in the hope of providing new ideas for generating naive porcine PSCs and animal breeding. | Jianyong HAN Yi-Liang MIAO Jinlian HUA Yan LI Xue ZHANG Jilong ZHOU Na LI Ying ZHANG Jinying ZHANG Zhonghua LIU | 2019 | Frontiers of Agricultural Science and Engineering2019，6，1： | 1 |
| 18 | iPSCs在家畜育种中的作用研究进展显示文摘胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)是一种具有多向分化潜能的多能性干细胞。大动物具有繁殖率低、世代间隔长等缺陷,利用ESCs进行扩繁、育种具有绝佳优势。但经过40年的探索,几乎所有大动物的ESCs尚未建立。2006年Yamanaka提出诱导多能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs)制备方法,为大动物干细胞制备打开一扇新大门。获得iPSCs可以成功避开ESCs建系困难、胚胎来源有限、移植后发生免疫排斥等一系列严重限制干细胞育种应用的问题,在大动物育种中有非常重要和深远的应用前景。本文综述了iPSCs在大动物育种中的研究进展,深入探讨了iPSCs作为干细胞在大动物育种中的潜在应用价值,并展望其应用前景。 | 徐彦文 周婧萱 师科荣 | 2022 | 中国畜牧杂志2022，58，4： | 1 |
| 19 | 水牛转录因子Sox2和Lin28克隆与表达研究显示文摘本研究克隆水牛特异性转录因子Sox2和Lin28,构建表达载体,为进一步研究2个基因在水牛干细胞多能性调控中的作用奠定基础。以胎牛生殖嵴总RNA为模版,采用RT-PCR扩增Sox2和Lin28的编码区序列(CDS),构建逆转录表达载体pMSCV-Sox2和pMSCV-Lin28,转入NIH3T3细胞,鉴定其表达情况。结果表明:水牛Sox2和Lin28的CDS全长分别为966 bp和618 bp,蛋白结构保守;Sox2、Lin28氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸序列的相似性分别为96%、95%、94%、94%和98%、97%、89%和91%;pMSCV介导的Sox2和Lin28能在NIH3T3细胞中表达。 | 邹灵秀 邓彦飞 陈凤 乔树叶 杨素芳 石德顺 | 2015 | 中国畜牧杂志2015，51，19： | 1 |
| 20 | 过表达JHDM2A对猪iPSCs诱导效率的影响显示文摘研究旨在探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶(JHDM2A)对猪成纤维细胞诱导为多能干细胞效率的影响,并对其内在的分子机制进行探究。以猪成纤维细胞为材料,采用多西环素(DOX)诱导的慢病毒生产诱导多能干细胞(iPSCs)体系,在此基础上过表达JHDM2A,通过碱性磷酸酶染色和绘制诱导时间轴检测其对诱导效率的影响;普通PCR技术检测克隆的多能性;免疫荧光检测多能因子的蛋白表达;实时荧光定量PCR检测JHDM2A在形成克隆后以及克隆分化过程中对多能因子、组蛋白甲基化相关基因表达的影响。结果表明,JHDM2A过表达组细胞在第3天发生形态变化,第8天形成iPSCs克隆,相比于对照组分别提前了1和2 d。碱性磷酸酶染色结果显示,与对照组相比,JHDM2A过表达组克隆形态明显改善,染色着色更深,诱导效率提高8倍。普通PCR结果显示,JHDM2A过表达组iPSCs、对照组iPSCs以及猪成纤维细胞(PFF)均表达内源性Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Nanog,且iPSCs的Oct4表达量高于PFF。免疫荧光结果显示,JHDM2A过表达组iPSCs表达Oct4、Sox2、Stat3、JHDM2A,弱表达SSEA1、SSEA4。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组和猪成纤维细胞相比,JHDM2A过表达组iPSCs的Sox2、Klf4、c-Myc、Nanog、Oct4、Tcl1的表达显著升高(P<0.05),Tfcp2l1和Zfp57的表达显著降低(P<0.05);JHDM2A过表达组P5代iPSCs培养基去除DOX后,随着代数的增加,Sox2、Nanog的表达逐渐降低,Klf4、c-Myc的表达先升高后降低,Oct4、Tcl1、Tfcp2l1、Zfp57的表达先降低后升高。以上结果表明,过表达JHDM2A通过促进组蛋白去甲基化提高猪成纤维细胞的诱导效率。 | 任宣 宋延霞 孙乐 黄时海 石德顺 李湘萍 | 2021 | 中国畜牧兽医2021，48，12： | 0 |
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