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1Effect of environmental factors on chemoresistance of HepG2 cells by regulating hypoxia-inducible factor-1α显示文摘ZHU Hong LUO Shun-feng WANG Ji LI Xin WANG Hui PU Wang-yang ZHANG Hong ZHUANG Zhi-xiang 2012Chinese Medical Journal2012,,6:6
2腺病毒介导BMP-2联合低氧诱导因子1α突变型与单基因BMP-2分别转染BMSCs后成骨效应的比较研究显示文摘目的比较腺病毒载体Ad-BMP-2-内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)-低氧诱导因子1α突变型(hypoxia inducible factor 1αmu,HIF-1αmu)与Ad-巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)-BMP-2-IRES-人源化海肾绿色荧光蛋白1(human renilla reniformis green fluorescent protein 1,hrGFP-1)分别转染BMSCs后的成骨效应,优化成骨细胞种子来源。方法取1月龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs。取第3代BMSCs进行病毒液转染,根据转染病毒液不同将实验分为4组,A、B、C组分别采用感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50、100、150和200的Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu、Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1、Ad-CMV-IRES-hrGFP-1(空腺病毒载体)转染细胞,D组为未被转染的BMSCs。选择最佳MOI值进行观察。转染后采用免疫组织化学染色检测BMP-2表达,Western blot检测BMP-2和HIF-1α蛋白表达,ALP活性测定和钙结节茜素红染色检测细胞成骨分化能力。结果 A、B、C组最佳MOI值分别为200、150和100。免疫组织化学染色示,A、B组BMP-2染色呈阳性,C、D组呈阴性;A组阳性细胞数明显多于B组(P<0.05)。Western blot检测示,A、B组BMP-2蛋白表达明显高于C、D组(P<0.05),A组高于B组(P<0.05);A组HIF-1α蛋白表达明显高于其余3组(P<0.05),其余3组间差异无统计学意义(P>0.05)。A、B组ALP活性明显高于C、D组(P<0.05),A组高于B组(P<0.05)。茜素红染色示,A、B组可见明显钙结节,C、D组未见钙结节形成;且A组钙结节数量多于B组(P<0.05)。结论单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu与单载体单基因Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1分别转染兔BMSCs后,前者BMP-2和成骨效应表达均高于后者。张解元 袁虹 李谌 李全营 郭威 刘丹平 2012中国修复重建外科杂志2012,26,9:4
3单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu转染内皮祖细胞后移植治疗缺血性股骨头坏死的实验研究显示文摘将构建的单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu转染到诱导的兔骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)后移植到股骨头缺血坏死(avascularnecrosis of the femoral head,ANFH)局部,检测其促进坏死区局部成血管和成骨能力。密度梯度离心法获取兔骨髓单个核细胞(mononuclearcells,MNCs),用M199培养基诱导MNCs为EPCs;通过细胞形态、特殊表面标记、摄取能力方面鉴定EPCs;将Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu载体转染到EPCs,再将其移植入ANFH模型局部;分别于术后2周、4周处死模型,行坏死区成血管和成骨指标检测。结果显示:与对照组(B组)和空白组(C组)相比,实验组(A组)有较多新血管生成(P<0.05),B组与C组比较有统计学差异(P<0.05);组织学及BMP-2免疫组化检测,A组与B组和C组之间差异具有统计学意义(P<0.05),B组与C组之间差异无统计学意义(P>0.05)。综上所述,该实验提示移植转染Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu的EPCs具有较强的成血管及成骨能力。齐鑫 刘丹平 赵辉 张解元 2013中国细胞生物学学报2013,35,7:0
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