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| 1 | 应用siRNA技术抑制产肠毒素大肠杆菌LT基因表达的研究显示文摘目的应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制产肠毒素大肠杆菌(ETEC)LT基因的表达。方法针对LT基因设计siRNAs序列,在ETEC培养过程中,将针对LT的siRNA、非特异性对照siRNA、阴性对照siRNA和LB培养基分别加入siRNA组(siRNA-LT1组、siRNA-LT2组)、siRNA-coa3组、siRNA-NC组和空白对照组,分3个时间点加入,每次1nmol。在首次加入siRNA后45min(A时间点)、90min(B时间点)、135min(C时间点)留取菌液,应用实时荧光定量PCR检测上述3个时间点5组LT mRNA的表达水平。应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测siRNA-LT1组、siRNA-LT2组和空白对照组在3个时间点的LT蛋白表达水平。结果实时荧光定量PCR结果显示,siRNA-LT1在A、B、C 3个时间点对LT mRNA表达的抑制率分别为70.9%、70.1%、72.5%,siRNA-LT2在A、B、C 3个时间点对LT mRNA表达的抑制率分别为70.1%、69.2%、70.5%,siRNALT1组、siRNA-LT2组对LT mRNA表达的抑制率与相应处理时间的siRNA-NC组、siRNA-coa3组、空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示,siRNA-LT1和siRNA-LT2在A、B、C 3个时间点对LT蛋白表达的抑制率分别为43.1%、18.4%、5.0%和38.2%、15.4%、30.1%。结论针对LT基因设计合成的siRNA在体外能有效地抑制LT基因的表达。 | 付瑞 刘华 段勇 王玉明 单斌 | 2015 | 国际检验医学杂志2015，36，8： | 1 |
| 2 | 单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP22真核表达载体的构建及其对Vero细胞活性的影响显示文摘目的构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染细胞蛋白22(ICP22)真核表达载体p EGFP-C2/ICP22并研究其对非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞活性的影响。方法经双酶切实验和测序验证,以Xfect为介导将构建的真核表达载体p EGFP-ICP22转染至Vero细胞,并通过反转录PCR(RT-PCR)和绿色荧光检验其在细胞中的表达,最后以MTT法检测细胞活性。结果 48 h后观察,发现转染重组质粒组细胞经RT-PCR验证有目的基因的转录,并通过荧光显微镜观察到融合蛋白表达。而空白质粒组只检测到荧光蛋白但未检测到目的基因转录本,且对照组未检测到荧光蛋白表达。转染重组质粒的细胞相对活性值为(82.39±6.44)%。结论成功构建了p EGFP-ICP22真核表达载体,实现了其在Vero中的表达,融合蛋白GFP-ICP22明显降低了细胞活性。为进一步探讨HSV-ⅡICP22的功能和HSV-Ⅱ潜伏复发机制奠定了实验基础。 | 张强 薄惠 邢建华 王高峰 | 2014 | 现代预防医学2014，41，22： | 0 |
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