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| 1 | Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响显示文摘目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70.重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆.荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Eznn和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对靶肿瘤细胞的杀伤作用.结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体.较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01%±0.22%上升至24.28%±0.50%,增殖速度则自395.14%±2.24%减少至310.00%±2.83%.另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达.而Ezrin-shRNMHSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果.MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT+IL-2+HSP70组的杀伤活性高于CT+IL-2组,最高达56.33%±1.95%.结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用. | 姚琴 赵慧毅 谢柏臻 | 2015 | 中华骨科杂志2015，35，2： | 6 |
| 2 | 不同乳腺癌细胞冻融抗原负载树突细胞的抑瘤功能研究显示文摘目的探讨不同乳腺癌细胞冻融抗原负载树突细胞(DC)的抑瘤功能。方法选取我院肿瘤外科乳腺癌手术患者纯化培养的乳腺癌细胞(A组)、乳腺癌组织(B组),购自北京协和医科大学的乳腺癌细胞株SKBR-3(C组)。分别制备冻融抗原,负载自体DC获得DC疫苗,以流式细胞仪和T淋巴细胞增殖实验检测DC表型及功能。结果诱导7 d后,3组DC的CD80、CD83、CD86和HLA-DR比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中A组和C组较B组均升高,差异有统计学意义(P<0.05);A组与C组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。A组CPM值(13 047±215),B组(4 964±148),C组(5 082±176),3组比较差异有统计学意义(F=5 200.7159,P=0.0000);其中A组较B组和C组均升高,差异有统计学意义(q值分别为125.8166和123.9803,P<0.01);B组与C组比较,差异无统计学意义(q=1.8363,P>0.05)。结论纯化的自体肿瘤细胞冻融抗原体外致敏DC,可介导显著的T细胞免疫反应,从而起到抑瘤功能。 | 曹天泽 高维实 郭慧军 马虎林 施晓辉 | 2013 | 中国全科医学2013，16，12： | 0 |
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