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| 1 | DNA重组技术的研究综述显示文摘DNA重组技术,即DNA克隆技术的研究和运用是现代生物学发展的一个重要分支,是分子生物学发展的突出领域。本文介绍了DNA重组的类型及相关的生物学概念;综述了目前已报道的传统的酶切-连接经典克隆方法、位点特异性重组克隆方法、以及同源重组克隆方法,重点阐述了各自的原理、步骤、特点及实际应用等方面;最后归纳总结了各种方法的优缺点和应用范围,并对该技术的科研成果进行了回顾和对未来的研究进行了展望。 | 张亚旭 | 2012 | 生物技术进展2012，2，1： | 8 |
| 2 | 几种新型植物基因表达载体的构建方法显示文摘利用基因工程技术手段研究基因功能过程中,构建基因表达载体处于转基因植物的主导地位,采用合适的构建方法会使实验效果事半功倍。植物基因表达载体的构建方法除了传统构建法、Gateway技术、三段T-DNA法、一步克隆法等,还有近年来出现的几种新型的载体构建方法:基于竞争性连接原理快速构建小片段基因表达载体;MicroRNA前体PCR置换法适用于构建小分子RNA表达载体;重组融合PCR法特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建;利用In-Fusion试剂盒可以将任何目的片段插入一个线性化载体的某个区域;构建多片段复杂载体可采用不依赖序列和连接的克隆方法(Sequence and ligation-independent cloning,SLIC)法;Gibson等温拼接法;Golden Gate拼接法。本文将在总结分析前人工作的基础上,结合自己工作的体会和经验分析这7种新方法的特点,期望通过这几种新的方法给植物基因工程表达载体的构建提供新的思路。 | 张阳璞 杨淑慎 | 2015 | 生物工程学报2015，31，3： | 8 |
| 3 | CKIP-1基因过表达慢病毒载体的构建及其在人前列腺增生细胞系BPH-1细胞中的表达显示文摘目的:构建酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(CKIP-1)基因慢病毒过表达载体,检测其在人前列腺增生细胞系BPH-1中的表达。方法:用In-Fusion技术将CKIP-1基因亚克隆到真核细胞表达载体(p Lenti CMV Puro Empty)。限制性内切酶对载体进行酶切并回收线性载体片段,PCR扩增CKIP-1基因,In-Fusion技术进行融合得到p Lenti CMV-CKIP-1。将构建成功的过表达质粒和慢病毒的两种辅助包装质粒PMD2G、PAPSX2共转染239T细胞,Western blot检测BPH-1细胞中CKIP-1蛋白的表达。结果:测序结果和Western blot检测均证明CKIP-1过表达慢病毒质粒构建成功,且在BPH-1细胞系中成功过表达。结论:成功构建了过表达CKIP-1基因的慢病毒质粒,且筛选到过表达CKIP-1的BPH-1稳转细胞系,为后续的实验奠定基础。 | 王礼鑫 褚明亮 尹丹 曹颖 官志忠 | 2017 | 甘肃医药2017，36，7： | 2 |
| 4 | BMP-2基因重组慢病毒载体转染猪BMSCs成骨分化研究显示文摘目的构建BMP-2基因重组慢病毒载体,并检测其转染猪BMSCs后BMP-2表达活性及诱导BMSCs成骨分化情况,为进一步构建组织工程骨软骨奠定基础。方法取2只2月龄巴马香猪(体重约15 kg)髂骨骨髓,采用密度梯度离心法分离培养BMSCs,并传代。利用基因重组技术构建BMP-2基因重组慢病毒载体,并以感染复数(multiplicity of infection,MOI)10、25、50、100、200转染第2代BMSCs,通过荧光显微镜及倒置相差显微镜观察确定最佳MOI值。以最佳MOI值感染BMSCs作为实验组,空载体转染的BMSCs(空载体组)及未转染的BMSCs(空白组)作为对照,通过RT-PCR、免疫组织化学染色、Western blot检测BMP-2 mRNA及蛋白在BMSCs中的表达,并应用ALP染色、ALP活性检测及茜素红钙结节染色检测其成骨分化情况。结果经RT-PCR基因测序鉴定BMP-2基因重组慢病毒载体构建成功,转染BMSCs后荧光显微镜下可见绿色荧光表达,且MOI值为100时为最佳表达。RT-PCR提示BMP-2基因成功转染至BMSCs中;免疫组织化学染色及Western blot检测示转染后BMSCs并可持续、稳定、高效表达BMP-2蛋白;培养后2周BMSCs可见ALP表达及钙结节形成。结论成功构建BMP-2基因重组慢病毒载体并转染猪BMSCs,BMP-2基因转染入BMSCs后能持续、稳定、高效表达BMP-2基因和蛋白,并成功诱导BMSCs向成骨细胞分化。 | 许胜贵 林建华 刘蔚楠 吴朝阳 | 2013 | 中国修复重建外科杂志2013，27，11： | 2 |
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