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| 1 | 环介导等温扩增技术检测细粒棘球绦虫DNA的初步研究显示文摘目的评价环介导等温扩增技术(LAMP)检测细粒棘球绦虫的敏感性。方法提取细粒棘球绦虫虫卵及成虫DNA,根据棘球绦虫线粒体12SrRNA基因序列及LAMP法原理,设计4条细粒棘球绦虫特异性引物,进行LAMP反应,反应产物经SYBRGreenⅠ显色及1.5%琼脂糖电泳鉴定,同时设置泡状带绦虫及空白对照。用1000、100、10、1个虫卵/200μl细粒棘球绦虫虫卵DNA进行LAMP反应,评价其敏感性。结果细粒棘球绦虫检测管反应液呈混浊沉淀,显色后为绿色;对照组澄清,显色后为棕色。虫卵产物电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组无扩增产物。LAMP可检测到的虫卵最低数量为1个。结论 LAMP法敏感、特异、简便,可用于棘球蚴病病原检测和疾病监测。 | 徐祥珍 金小林 李健 江文才 蒋岗 | 2011 | 中国血吸虫病防治杂志2011，23，5： | 10 |
| 2 | 包虫病及其诊断技术概述显示文摘包虫病(hydatidosis)又称棘球蚴病(echinococcosis),是由棘球属(Echinococcus)绦虫的幼虫—棘球蚴(Echinococcus orhydatidcyst)寄生于人兽体内引起的一类严重危害人体健康和畜牧业健康发展的重要人兽共患寄生虫病。目前已确认的棘球属绦虫有5种,即细粒棘球绦虫(E.granulosus,Eg)、多房棘球绦虫(E. | 李伟 高金亮 | 2017 | 中国卫生检验杂志2017，27，13： | 9 |
| 3 | 重组酶介导的等温核酸扩增技术检测多房棘球绦虫方法的建立及初步应用显示文摘目的基于重组酶介导的等温扩增技术(Recombinase-aided isothermal amplification assay,RAA)建立一种快速检测多房棘球绦虫的核酸检测方法,并进行检测效果评价。方法以多房棘球绦虫线粒体基因序列(GenBank登录号:AB018440)作为靶序列,根据RAA反应原理设计并合成引物,利用该引物进行RAA扩增。以聚合酶链反应(PCR)作为平行对照,应用RAA方法扩增不同稀释浓度的多房棘球绦虫基因组DNA及梯度稀释的含不同拷贝数目的基因片段的pMD19-T(Simple)克隆质粒,以评价RAA检测的敏感性。应用此方法检测细粒棘球绦虫(G1型)、牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第虫、肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA,以评价其特异性。在对建立的方法进行条件优化后,检测9份感染多房棘球蚴的动物组织样本、3份模拟现场多房棘球蚴感染阳性犬粪样本以及2份现场阳性犬粪样本,以验证所建立的RAA方法的可靠性和实用性。结果所建立的RAA法可在40 min内特异性扩增多房棘球绦虫目的基因片段。以多房棘球绦虫基因组DNA为模板,RAA法最低检测量为10 pg;以重组质粒为模板,RAA法最低可检出的质粒拷贝数为10^4个。以细粒棘球绦虫(G1型)、牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第虫、肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA为模板,应用所建立的RAA法扩增结果均为阴性。应用本研究建立的RAA法检测感染多房棘球蚴的动物组织样本以及模拟和现场阳性犬粪便样本结果均为阳性,且与PCR法检测结果一致。结论本研究建立了一种反应快捷、敏感性和特异性均较高的RAA检测方法,其在多房棘球绦虫虫种鉴定以及棘球蚴病基因诊断方面展现出较好应用前景。 | 周鸿让 陈木新 余晴 艾琳 王莹 许秋利 肖宁 | 2020 | 中国血吸虫病防治杂志2020，32，2： | 7 |
| 4 | 重组酶介导的多重核酸等温扩增法鉴别细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫技术的建立与应用显示文摘目的建立一种快速检测细粒棘球绦虫G1(EgG1)与多房棘球绦虫(Em)DNA的重组酶介导的多重核酸等温扩增方法(mRAA)。方法以EgG1和Em线粒体基因作为靶序列,设计特异性引物,建立快速检测棘球绦虫的mRAA方法。分别扩增浓度为10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05、0.01 ng/μl棘球绦虫基因组DNA及10^5、10^4、10^3、10^2、10个拷贝/μl的pMD19-T(Simple)克隆质粒,评价mRAA方法的敏感性;分别以牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA为模板,评价mRAA方法的特异性。采用优化后的m RAA方法,分别对3份EgG1和Em混合模拟犬粪样、19份现场采集的棘球绦虫感染动物肝脏组织(10份EgG1感染、9份Em感染)、7份现场采集的棘球绦虫阳性犬粪(5份EgG1感染、2份Em感染)进行检测,验证m RAA方法的可靠性和实用性。结果建立的mRAA方法可特异性扩增EgG1和Em线粒体基因片段,长度分别约为250 bp、500 bp。mRAA方法对EgG1和Em基因组DNA的最低检测限为2 pg/μl,对EgG1和Em重组质粒的最低检测限为200个拷贝/μl。mRAA方法对牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA的扩增结果均为阴性。mRAA方法成功检出所有EgG1和Em混合模拟犬粪样、棘球绦虫感染动物肝脏组织、棘球绦虫阳性犬粪样,且检测结果与mPCR一致。结论建立的mRAA方法可用于EgG1和Em DNA的快速检测,敏感性、特异性和可靠性均较好。 | 周鸿让 茅光耀 王晓玲 陈木新 余晴 王莹 艾琳 肖宁 | 2020 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2020，38，3： | 6 |
| 5 | 重组酶介导等温核酸扩增技术检测细粒棘球绦虫方法的建立及初步应用评价显示文摘目的建立一种新的敏感、特异且能快速检测细粒棘球绦虫G1的重组酶介导扩增技术(Recombinase aided isothermal amplification,RAA)。方法以细粒棘球绦虫G1(E.granulosus G1,EgG1)线粒体基因序列(GenBank No.AF297617)作为靶序列设计合成引物,以EgG1 DNA为模板进行RAA扩增,反应产物预期大小为284 bp。以聚合酶链式反应(PCR)作为平行对照,应用RAA扩增不同稀释浓度的基因组DNA及梯度稀释的含目的基因片段不同拷贝数的pMD19-T(Simple)克隆质粒,以评价RAA检测方法的检测灵敏度;应用此方法检测多房棘球绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、贾第鞭毛虫、肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA,以评价方法的特异性。方法优化后用于检测感染EgG1的动物组织标本(10份)、模拟现场阳性犬粪标本(3份)以及现场阳性犬粪标本(5份),以验证该项检测技术的可靠性和实用性。结果建立的RAA法可在40 min内特异性扩增EgG1的目的基因片段,最低可检测量为10 pg;以重组质粒为模板,RAA法最低检出质粒拷贝数为104个。用建立的RAA法检测其他寄生虫(包括多房棘球绦虫)结果均为阴性。用优化的RAA方法检测感染EgG1的动物组织标本以及阳性粪便标本(包括模拟现场粪便标本),结果均为阳性,且与PCR检测结果一致。结论建立的针对EgG1的RAA方法,其具有简便快捷、检测灵敏度与特异性均较好的特点,可望用于细粒棘球绦虫虫种的鉴定以及棘球蚴病基因诊断。 | 周鸿让 王晓玲 许秋利 艾琳 陈木新 余晴 肖宁 | 2020 | 中国病原生物学杂志2020，15，6： | 5 |
| 6 | 棘球绦虫与棘球蚴病检测技术研究进展显示文摘棘球蚴病是由棘球绦虫的幼虫寄生于人体引起的一种慢性寄生虫病,由于棘球绦虫生活史复杂、流行范围广泛以及宿主种类众多,控制传播和消除棘球蚴病仍较困难。在棘球蚴病早期,准确的诊断和检测,实时监测各类宿主的感染情况,从源头控制传染源和阻断传播途径非常关键。本文综述了近年来棘球绦虫检测技术及相关研究进展,包括形态学检测技术、影像学诊断技术、免疫学技术及分子生物学技术等,以期为棘球绦虫及棘球蚴病的检测与诊断提供参考。 | 周鸿让 陈木新 王莹 余晴 肖宁 | 2019 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2019，37，3： | 3 |
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