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| 1 | 慢病毒介导Vimentin基因沉默抑制胰腺癌细胞侵袭和粘附的机制显示文摘目的应用慢病毒介导的shRNA基因沉默技术,有效沉默人胰腺癌细胞株Panc-1中Vimentin表达,并探讨下调Vimentin后对Panc-1细胞侵袭运动及粘附能力的影响及其机制。方法 Lv-VIM-GFP-shRNA慢病毒转染人胰腺癌细胞株Panc-1,Real-time PCR、Western blot和免疫荧光法检测慢病毒转染后Vimentin的沉默效率;Transwell小室体外运动侵袭实验及划痕实验比较细胞运动侵袭能力变化,细胞粘附实验检测细胞粘附能力的变化;Real-time PCR和Western blot检测肿瘤侵袭和粘附相关因子的表达,免疫荧光法观察转染前后细胞骨架蛋白F-actin和黏着斑激酶FAK的变化。结果 Lv-VIM-GFP-shRNA慢病毒转染Panc-1后能稳定下调其Vimentin的表达(P<0.01)。Transwell小室及划痕实验显示,下调Vimentin后能显著抑制Panc-1细胞的侵袭及迁移能力(P<0.01)。粘附实验结果显示,粘附30min后,转染Lv-VIM-GFP-shRNA组较对照组粘附CollagenⅣ和FN的细胞数量均减少(P<0.05)。下调Vimentin后对肿瘤侵袭及粘附相关因子的mRNA和蛋白水平无明显影响(P>0.05),但能引起细胞骨架F-actin的解聚以及黏着斑激酶FAK的重排。结论 Vimentin基因沉默后可能通过引起F-actin骨架解聚、黏着斑激酶FAK重排来降低细胞与细胞外基质的粘附及细胞运动能力,从而抑制胰腺癌细胞的侵袭和转移。 | 李旭 江建新 王敏 朱峰 田锐 申铭 秦仁义 | 2013 | 华中科技大学学报(医学版)2013，42，3： | 7 |
| 2 | Hsa-microRNA-138慢病毒表达载体的构建与鉴定显示文摘目的:构建hsa-microRNA-138慢病毒表达载体。方法:PCR扩增pri-miR-138-2前体序列,克隆至plenti-GFP慢病毒表达载体,双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装与滴度检测;构建成功后感染人胰腺癌细胞PANC-1,48 h后Real-time Q-PCR检测miR-138的表达。结果:酶切、测序鉴定证明插入序列正确,测定病毒滴度为1×109TU/ml,病毒感染48 h后的PANC-1胰腺癌细胞观察可见绿色荧光,Real-time Q-PCR显示被感染细胞的miR-138表达量较未感染细胞显著增高。结论:建立了高效稳定表达hsa-miR-138的慢病毒转染系统。 | 江建新 吴渊 高珊 孙诚谊 | 2012 | 贵阳医学院学报2012，37，5： | 1 |
| 3 | Lv-shRNA-Hsa-microRNA-691慢病毒表达载体的构建与鉴定显示文摘目的构建Lv-shRNA-hsa-microRNA-691慢病毒表达载体。方法 PCR扩增pri-miR-691-2前体序列,克隆至plenti-GFP慢病毒表达载体;双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装与滴度检测。构建成功后感染人胰腺癌细胞Panc-1,48h后Real-time Q-PCR检测miR-691的表达。结果酶切、测序鉴定证明插入序列正确,测定病毒滴度为1×109TU/m L,病毒感染48h后的Panc-1胰腺癌细胞在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光,Real-time Q-PCR显示被感染细胞的miR-691表达量较未感染细胞显著增高。结论建立了高效稳定表达Lv-shRNA-hsa-miR-691的慢病毒转染系统。 | 何燕浙 唐德军 | 2016 | 肝胆外科杂志2016，24，4： | 0 |
| 4 | 慢病毒介导KAP-1增强胰腺癌细胞Capan-2侵袭能力显示文摘目的观察KAP-1基因对人胰腺癌细胞Capan-2侵袭能力的影响,探求该基因作为治疗靶点的可行性。方法针对KAP-1基因构建真核表达载体,在293T细胞中包装成重组慢病毒Lv-eGFP-KAP-1,RT-qPCR和Western Blot法检测其对Capan-2细胞KAP-1的影响,Transwell侵袭小室检测其对Capan-2细胞侵袭能力的影响。结果成功地构建Lv-eGFP-KAP-1,感染Capan-2后细胞侵袭数目(128.3±4.6)较空白对照组(45.3±2.6)与阴性对照组(36.2±3.4)明显增加,差异有显著性(P<0.05)。结论 Lv-eGFP-KAP-1能显著上调Capan-2细胞KAP-1的表达,增强其侵袭能力,KAP-1基因有可能成为胰腺癌基因治疗的新靶点。 | 江建新 詹磊 黄洋 何燕浙 喻超 孙诚谊 | 2013 | 中国现代医学杂志2013，23，13： | 0 |
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