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| 1 | 神经干细胞培养及其影响因素显示文摘背景:神经干细胞移植治疗是中枢神经系统损伤性、难治性疾病研究的热点。如何有效提高神经干细胞存活率、克隆形成率将是其应用的重要基础和前提。目的:探讨影响神经干细胞培养质量的可能因素,为神经干细胞的基础和临床应用研究提供参考。方法:①神经干细胞分离和培养:分离出生24h内SD大鼠的大脑,剪碎离心后以1×108L-1的浓度接种,经含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基预培养4h后改用无血清条件培养基(DMEM/F12,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27)培养,2d或3d换液1次,6d时传代。②神经干细胞鉴定:倒置显微镜下观察细胞形态及生物学特性;免疫组化检测第3代细胞神经巢蛋白表达和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶和神经胶质酸性蛋白的表达。结果与结论:出生24h的新生大鼠可获得足量的神经干细胞;血清预培养可提高神经干细胞的增殖和存活率;免疫组化结合血清诱导分化可对培养的神经干细胞进行定性鉴定。取材时间、细胞接种密度、传代时间、细胞因子、血清等多种因素都将影响神经干细胞的培养质量。 | 徐富翠 邹礼乐 梅欣明 郭勇 | 2013 | 中国组织工程研究2013，17，10： | 17 |
| 2 | 神经节苷脂联合神经干细胞移植对颅脑损伤大鼠海马的作用显示文摘背景:应用神经干细胞移植治疗脑损伤后神经功能障碍的实验研究是目前的热点。目的:观察神经节苷脂联合神经干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠海马神经元的影响。方法:健康Wistar大鼠66只,采用改进Feeney法制作创伤性脑损伤致海马神经元损伤模型,存活的60只大鼠伤后24h给予相应治疗随机分为3组:创伤性脑损伤组注射1mL DMEM/F12培养液;神经干细胞组注射1×1010L-1神经干细胞悬液;神经干细胞+神经节苷脂组注射1×1010L-1神经干细胞悬液后经腹腔注射30mg/kg神经节苷脂水溶液,1次/d,连续3d。结果与结论:荧光显微镜观察PKH26标记的神经干细胞呈球形,呈现均匀分布的红色荧光;PKH26标记神经干细胞的阳性率为95%。各组平均潜伏时间均逐渐缩短,神经干细胞+神经节苷脂组3~5d时平均潜伏时间较神经干细胞组缩短(P<0.05),较创伤性脑损伤组明显缩短(P<0.01);神经干细胞+神经节苷脂组穿越平台次数及在目标象限游泳距离与总距离百分比均高于其他两组(P<0.05)。PKH26阳性细胞和苏木精-伊红染色切片中的神经元数量及脑源性神经营养因子mRNA的表达神经干细胞+神经节苷脂组多于神经干细胞组,神经干细胞组多于创伤性脑损伤组(P<0.05)。提示神经干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠海马神经元有保护作用,联合应用神经节苷脂有协同效果。 | 李红星 赵宗茂 金耀东 王静 苑国富 | 2012 | 中国组织工程研究2012，16，10： | 12 |
| 3 | 神经干细胞移植治疗帕金森病的有效性与安全性显示文摘背景: 目前临床应用扩增的神经干细胞治疗神经系统疾病仍在探索阶段。目的: 探讨神经干细胞移植治疗帕金森病的有效性以及安全性。方法: 取12周人胚胎脑组织体外培养扩增,计数5×106-2×107制作成混悬液4-6mL,通过腰穿、颈动脉注射途径植入30例帕金森病患者体内,1次/周,共3次。移植前后进行统一帕金森病评定量表(UPDRS)、修正Hoehn-Yahr分级量表、帕金森病Schwab&England日常活动分级量表评分。移植前后检测和评估血尿常规、肝功、肾功、不良反应。结果与结论: 12周龄胚胎培养的神经干细胞可在体外稳定扩增,并且具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力。通过随访发现神经干细胞移植能有效控制帕金森病病理进程、恢复受损脑功能,改善患者的神经功能,无明显并发症。可见应用体外长期扩增的人类神经干细胞移植治疗帕金森病是可行和有效的。 | 张晓英 | 2013 | 中国组织工程研究2013，17，27： | 11 |
| 4 | 促红细胞生成素对脊髓源性神经干细胞分化能力的影响显示文摘目的探讨成体大鼠脊髓源性神经干细胞(NSCs)在促红细胞生成素(EPO)的作用下体外分化的形态学表现,为成体脊髓源性NSCs移植治疗脊髓损伤提供理论基础。方法利用无血清悬浮培养,体外分离培养SD大鼠脊髓源性NSCs,随后以含血清培养基贴壁诱导分化培养7 d,行免疫细胞化学染色,以抗巢蛋白(Nestin)鉴定NSCs,以抗微管相关蛋白2(MAP2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色检测NSCs的分化情况。选取第3代NSCs,向培养基中添加EPO,使EPO的终浓度为10 IU/ml,并设不添加EPO的对照组,免疫荧光共聚焦显微镜下分别观察并计数各组神经元/细胞总数得出百分率。结果 SD大鼠脊髓组织体外悬浮培养可获得大量神经球,所获得的神经球均表达Nestin蛋白,以含血清培养基贴壁诱导分化培养,可检测出MAP2和GFAP阳性细胞;EPO组诱导分化后,表达MAP2阳性细胞较对照组显著提高(P<0.05)。结论 SD大鼠脊髓体外培养可获得NSCs,EPO可促进成体脊髓源性NSCs向神经元方向分化。 | 李小波 张辉 王少滨 刘杰 余涛 杜怡斌 尹宗生 | 2016 | 安徽医科大学学报2016，51，1： | 4 |
| 5 | 中药复方“脊髓康”对神经干细胞分化作用的影响显示文摘目的:探讨中药复方'脊髓康'对神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)分化作用的影响。方法:制备'脊髓康'(JSK)含药血清;分离、培养原代NSCs;对NSCs进行鉴定;在胎牛血清(FBS)诱导NSCs分化后,加入不同剂量的JSK含药血清干预其分化,分为高、中、低剂量组,另设空白对照组,选取抗β3-微管蛋白(βⅢ-Tubulin)抗体、抗兔胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体对NSCs进行免疫荧光双标,检测其分化情况,并与不加含药血清的对照组进行对比;在荧光显微镜下,对不同视野βIII-Tubulin、GFAP的阳性细胞进行计数,并算出阳性细胞数占总细胞数的百分比,并进行荧光定量。结果:培养的神经球均表打巢蛋白(Nestin);JSK含药血清高、中、低剂量组βIII-Tubulin阳性细胞所占百分比明显高于空白组(P<0.05);JSK含药血清高、中、低剂量组GFAP阳性细胞所占百分比均低于空白组(P<0.05),且高剂量组与中、低剂量组比较均有统计学意义(P<0.01)。结论:中药复方JSK促进NSCs向βIII-Tubulin阳性细胞方向分化,为中医药治疗SCI提供一定的依据。 | 苑文超 王磊 马勇 黄桂成 郭杨 潘娅岚 杨博元 董晤训 宗永刚 | 2017 | 世界科学技术-中医药现代化2017，19，10： | 3 |
| 6 | 胎鼠脊髓神经干细胞分离培养及诱导分化显示文摘目的探讨机械分离法与酶消化法在脊髓源性神经干细胞(NSCs)体外培养的优劣,并观察脊髓源性NSCs体外培养时增殖和分化的特点。方法取妊娠第15天(E15 d)的胎鼠神经管组织,分别采用酶消化法和机械吹打分离法离散细胞,进行无血清培养,并以上述两种方法传代培养。借助免疫细胞化学法对NSCs及分化结果进行鉴定,细胞球计数法检测成球率,测量神经球直径分析细胞增殖能力,MTT法监测细胞生长情况。结果①培养的细胞具有增殖成球生长的特性并且抗巢蛋白免疫荧光阳性、血清可诱导分化出胶质细胞酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性希醇化酶(NSE)阳性表达的细胞。②细胞直径:酶消化组(137.74±11.62)μm,机械分离组(143.69±12.20)μm(P>0.05)。③生长曲线结果显示酶消化组NSCs综合生长增殖能力较高,OD值:酶消化组(0.39±0.15),机械分离组为(0.36±0.13)。结论胎鼠脊髓组织中存在具有自我增殖和多分化潜能的NSCs,原代无血清成球培养时采用酶消化法更有利于获得较多NSCs。 | 赵明佐 杜勇 刘海阳 周长城 强晓鑫 简鹏 | 2014 | 宁夏医科大学学报2014，36，2： | 0 |
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