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| 1 | 现代生物技术与饲用微生态制剂显示文摘近年来,使用抗生素的副作用越来越多地受到关注,世界上许多国家已出台相应政策来控制抗生素的使用。但是由于养殖行业的迅猛发展,养殖密度加大,养殖动物病害发病的风险提高,急需可替代抗生素的新型绿色饲料添加剂产品。微生态制剂作为一种新型绿色饲料添加剂,在养殖行业发挥了重要作用。随着饲用微生态制剂产品研发的深入,现代生物技术在提升微生态制剂的理论和应用研究方面发挥着重要作用。PCR、核酸分子杂交、基因工程以及组学等技术已应用于微生物菌种鉴定、基因改良、作用机理等研究中。本文对饲用微生态制剂的研发现状进行了阐述,并综述了现代生物技术在饲用微生态制剂研究中的应用。 | 王际辉 刘诗文 肖珊 刘冰南 王晗 | 2015 | 微生物学杂志2015，35，2： | 15 |
| 2 | 以绿色荧光蛋白标记干酪乳杆菌的构建显示文摘为了更直接、更方便检测乳酸杆菌表达系统,研究通过PCR法以质粒pEGFP-C1为模板扩增出增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)序列,将扩增产物连接到乳酸杆菌的整合型载体pMJ67上,成功构建了重组质粒pMJ-egfp。将质粒pMJ-egfp电转化入乳酸杆菌L.casei CECT5276,egfp编码序列通过质粒上的Lac操纵子同源重组整合到L.casei CECT5276染色体上,连续传代50次,发现绿色荧光蛋白能够稳定遗传。说明试验获得了能在无抗性选择压力下稳定表达绿色荧光蛋白的重组菌L.casei CECT5278。 | 丁轲 丁盼盼 余祖华 李旺 李元晓 曹平华 程相朝 张春杰 | 2014 | 黑龙江畜牧兽医2014，，10： | 3 |
| 3 | 枯草杆菌ylmK基因的荧光标记及Ylmk蛋白的亚细胞定位显示文摘目的:对枯草杆菌ylmK基因进行3'端荧光标记以便对其产物YlmK蛋白在菌体中的位置进行初步观察。方法:以BS168菌株基因组DNA为模板,PCR扩增ylmK基因的3'端序列,并将其克隆到载体pSG1164中,形成ylmK'-gfpmutl融合,构建重组载体pNG424;将pNG424转化枯草杆菌168菌株,单交换形成完整的功能性3'端gfpmutl标记的ylmK基因,菌落PCR对阳性转化子BS362进行鉴定,用表面荧光显微镜技术对BS362进行观察。结果:荧光检测结果表明GFP标记的YlmK分布于菌体的外周,在位置上靠近细胞膜并与之平行排列。结论:YlmK是一种膜蛋白。 | 霍乃蕊 Lewis P J | 2010 | 激光生物学报2010，19，1： | 1 |
| 4 | 枯草杆菌可溶性YlyA蛋白的诱导表达与纯化研究显示文摘YlyA是枯草杆菌一种功能未知蛋白。本研究旨在建立可溶性YlyA的诱导表达体系和纯化方法,为其功能研究奠定基础。PCR扩增ylyA序列,将其克隆到pETMCSIII中构建表达载体pNG252,用IPTG诱导6×His-YlyA融合蛋白在大肠杆菌B121(DE3)中表达,对表达产物进行分析,最后对可溶性YlyA重组蛋白进行Ni^2+-NTA亲和层析加以纯化。结果表明pNG252中ylyA的插入方向正确,序列无突变;用0.5mmol/L IPTG,37℃诱导3h时,YlyA虽高效表达,但为包涵体形式;调整诱导条件至0.05mmol/L IPTG,25℃,5h时,高效表达的YlyA部分转为可溶性蛋白。纯化后的YlyA浓度达204.2119μmol/L;调整洗涤液中的咪唑浓度至15mmol/L,pH至9,可使纯化蛋白的产量大幅提高。本文成功构建了YlyA高效可诱导表达载体,建立了可溶性蛋白的诱导表达条件,确立了Ni^2+-NTA亲和层析纯化方法,所得的6×His-YlyA融合蛋白,可用于YlyA晶体结构和与功能分析。 | 高文伟 霍乃蕊 | 2009 | 激光生物学报2009，18，3： | 1 |
| 5 | 枯草杆菌ylyA基因表达载体的构建及诱导表达显示文摘ylyA是枯草杆菌的一种功能未知基因,本研究旨在建立YlyA的诱导表达体系,为其结构分析和功能研究奠定基础。PCR扩增ylyA序列,将其克隆到pETMCSIII中构建表达载体pNG252,测序分析无突变后用IPTG诱导6×His-YlyA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达产物进行分析。实验结果表明:pNG252中ylyA插入方向正确,序列无突变;新鲜的转化子培养至OD600为0.7左右时,用0.000 5 mol.L-1IPTG,37℃诱导3 h,YlyA高效表达。因此本研究成功构建了YlyA高效可诱导表达载体并建立了YlyA蛋白的诱导表达条件,所得到的6×His-YlyA融合蛋白,纯化后可用于YlyA晶体结构分析和功能研究。 | 霍乃蕊 | 2009 | 山西农业大学学报(自然科学版)2009，29，4： | 0 |
| 6 | 绿色荧光蛋白标记在MEOR中的应用研究显示文摘为了充分认识目的优势菌种经油藏运移后在产出水中分布的规律与数量,准确分析和客观评价MEOR现场试验效果,利用绿色荧光蛋白(GFP)基因标记目的菌,通过绿色荧光蛋白跟踪监测目的菌的动态信息。构建含有GFP基因的质粒pET-30a(+)-EGFP,并将其成功导入JD中。对构建的JD(gfp)工程菌进行培养发现,该工程菌在含有Kan质量浓度50μg/mL的培养条件下,重组质粒在JD(gfp)工程菌体内传代稳定,绿色荧光的表达稳定。但是在没有选择压力的培养条件下,重组质粒在JD工程菌胞体内有丢失现象。与野生菌混合培养,JD(gfp)工程菌具有很好的配伍性和竞争性,并且不发生重组质粒的水平转移,因此在环境中释放是安全的。 | 张忠智 孙珊珊 王欲晓 罗一菁 | 2009 | 石油化工高等学校学报2009，22，4： | 0 |
| 7 | YlyA和RNA聚合酶的反应性鉴定显示文摘目的:用亲和层析法鉴定YlyA与RNA聚合酶(RNAP)的结合性能。方法:将YlyA分别上样于以Affigel15为亲和介质制备的空白柱、牛血清白蛋白(BSA)柱和RNAP柱;以GreA和绿色荧光蛋白(GFP)为阳性和阴性对照蛋白分别上样于同一RNAP柱,洗涤和洗脱缓冲液(pH均为7.9)的盐离子浓度分别为30 mmol/L和400 mmol/L;用免疫印迹法对洗涤和洗脱流出液中的YlyA进行检测。结果:在空白柱和BSA柱的洗脱收集液中,没有检测到YlyA,大量的YlyA出现在了洗涤收集液中;而在RNAP柱的洗脱收集液中,检测到了YlyA和GreA,没有检测到GFP。结论:YlyA与RNAP之间具有特异性结合能力,为YlyA极有可能是一种转录因子的生物信息学分析结果提供了实验证据。 | 霍乃蕊 LEWIS P J | 2010 | 激光生物学报2010，19，5： | 0 |
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