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| 1 | 聚乙二醇安替安吉肽单抗制备及血药浓度检测方法的建立显示文摘聚乙二醇安替安吉肽是抗肿瘤多肽安替安吉肽的聚乙二醇修饰产物,为了检测血液中聚乙二醇安替安吉肽含量,利用有限稀释法对分泌安替安吉肽的杂交瘤细胞克隆化并进行筛选,将筛选得到的细胞株制备的单克隆抗体用于建立间接竞争ELISA检测血浆中聚乙二醇安替安吉肽含量。经克隆化筛选出的杂交瘤细胞生长迅速,细胞形态圆润,小鼠腹腔注射细胞数量为5×105时,d 9能收集腹水,收集腹水体积(7.06±0.56)m L,腹水效价1∶5.0×105。利用方阵法确定理想的包被抗原浓度为1∶4 000,一抗工作浓度为1∶32 000,该方法可检测线性范围为(25~3 200)ng/m L,回归方程为y=0.273x-0.277(R2=0.998 7),并且具有较好的回收率、准确度、精确度,回收率为(96.75~97.23)%,准确度为(94.9~95.89)%;日内相对标准偏差、日间相对标准偏差分别为(1.23~2.7)%和(2.94~5.82)%。利用ELISA方法测得聚乙二醇安替安吉肽大鼠体内消除半衰期为(23.585±2.214)h,达峰时间(24±0.629)h。由此表明,利用制备的单克隆抗体建立的间接竞争ELISA方法能够特异、可靠的检测聚乙二醇安替安吉肽血药浓度。 | 陈巨冰 何俊劲 吴蕊伶 徐寒梅 | 2015 | 药物生物技术2015，22，4： | 1 |
| 2 | 单环刺螠硫醌氧化还原酶间接竞争ELISA检测方法的建立显示文摘硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶。本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物—单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达奠定了基础。将SQR重组蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,检测效价高达1:64 000。采用免疫印迹实验,将该抗体与重组蛋白和体壁总蛋白杂交,均得到了单一的条带,表明该抗体特异性好。优化SQR间接竞争ELISA检测条件,得出最佳的抗原包被浓度为250ng/mL,一抗浓度为1∶20 000,二抗浓度为1∶12 000,此条件下建立的标准曲线检测范围为2.5~1 000ng/mL。精确度检测结果显示,批内差异在0.42%~7.27%、批间差异在2.58%~7.78%范围内,表明该条件下精确度具有良好的准确性和重复性。以上结果表明,已成功建立单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法。 | 马玉彬 史晓丽 李阳 董英萍 张立涛 张志峰 | 2012 | 中国海洋大学学报(自然科学版)2012，42，7： | 0 |
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