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| 1 | 小鼠节律基因clock,bmal1 3'UTR重组质粒构建与应用显示文摘为探讨miRNA与节律基因的相互作用,首先通过NCBI查找小鼠节律基因clock,bmal1 3'UTR序列,PCR扩增节律基因clock,bmal1 3'UTR全长后将目的片段定向克隆到PGL3-promoter质粒上并测序验证,构建节律基因clock,bmal1 3'UTR重组质粒。然后通过Target Scan软件预测可能与clock,bmal1 3'UTR相互作用的miRNAs,利用脂质体将miRNA模拟物与重组质粒共转293T细胞进行荧光活性检测,初步分析可能调控clock,bmal1表达的miRNAs。结果显示,采用RVP4引物进行的重组质粒反向测序结果与NCBI上查找的序列反向互补,成功构建小鼠节律基因clock,bmal1 3'UTR重组质粒,为进一步研究节律基因转录后调控机制奠定基础。miR-199a-5p(P<0.05)与miR-142-3p(P<0.01)下调重组质粒活性约33%和45%,初步证实miR-199a-5p能够与clock 3'UTR,miR-142-3p能够与bmal1 3'UTR作用调控基因转录活性。 | 王艳利 吕柯 陈海龙 冀国华 王婷梅 张永亮 毕蕾 钟萍 曲丽娜 李莹辉 | 2016 | 生物学杂志2016，33，4： | 0 |
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