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| 1 | 舌鳞癌侵袭转移相关蛋白CD63-LEL结构域表达及纯化显示文摘目的构建p ET-29a-CD63-LEL重组质粒,诱导蛋白表达,鉴定表达产物并纯化蛋白,为后续研究CD63-LEL蛋白对人舌鳞癌侵袭转移的影响奠定基础。方法根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)中查询到的CD63-LEL基因序列,运用RT-PCR技术从TCA-8113细胞中获得CD63-LEL的c DNA序列,经PCR、双酶切及测序确定获得p ET-29a-CD63-LEL重组载体后,转化至大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)感受态中,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-Dgalactoside,IPTG)诱导表达,运用镍柱亲和层析法纯化获得p ET-29a-CD63-LEL融合蛋白。结果成功构建了p ET-29aCD63-LEL重组质粒,经SDS-PAGE凝胶电泳检测:在37℃,1 mmol/L IPTG诱导12 h p ET-29a-CD63-LEL蛋白表达量高;在咪唑浓度为MCAC-80/100/200/500条件下可洗脱目的蛋白,Western blot检测Ni-NTA agarose纯化蛋白大小位于26 k U和35 k U处。结论在大肠埃希菌中获得了p ET-29a-CD63-LEL蛋白的大量表达,经镍柱亲和层析可得到较纯的p ET-29aCD63-LEL蛋白。 | 侯美玲 梁雪雪 谭李倩 刘文慧 王文 赵微 李新 | 2016 | 解放军医学院学报2016，37，2： | 0 |
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