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1实时荧光PCR技术在食品检验领域的应用显示文摘食源性致病菌、转基因食品等生物污染监测和控制是食品安全风险监测和控制的重要领域之一,核酸作为每一物种独一无二的身份证明,在食源性致病菌、益生菌、动物源性食品、过敏原食品、转基因食品乃至食品真伪鉴定和检测中是最理想的检测载体,结合强大的实时荧光PCR核酸检测技术,为食品安全监测、风险评估及食品品质保障提供了有利的技术支撑。本文对目前实时荧光PCR技术在食品领域的应用和进展作一概述。窦丽芳 李梦迪 方慧文 2015食品安全导刊2015,,7X:1
2双重TaqMan实时荧光PCR同时检测沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌方法的建立显示文摘以建立沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌双重Taq Man PCR方法为例,阐述Taq Man PCR方法建立的系统步骤和关键要素为目的,采用根据沙门氏菌Fim Y和单核细胞增生李斯特菌iap基因序列利用ABI primer express 3.0软件设计了物种特异性引物和Taq Man探针,采用标准曲线优化法对双重反应体系中引物和探针、Mg2+、d NTP浓度和Taq酶用量以及热循环条件等关键要素进行了优化,借助单双重PCR比较试验、多重PCR高低丰度模板抑制试验、灵敏度、特异性和重复性试验对建立的方法进行了验证进而得出了这样的结果:我们建立了涵盖设计要素、质控设置、体系优化、评价指标、验证试验共5个关键环节的双重Taq Man实时荧光PCR方法建立模式。建立的方法灵敏度高,沙门氏菌100CFU/ml,单增750CFU/ml;特异性强,对8种阳性菌株和37种近缘及远缘关系的阴性菌株成功鉴别的方法。本研究可借鉴应用于所有以核酸为检测对象的Taq Man PCR方法的建立模式。窦丽芳 李梦迪 曾爱民 2015食品安全导刊2015,,6X:1
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