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| 1 | RACK1及其缺失突变体与CLIC1的共定位研究显示文摘目的运用分子克隆技术构建活化蛋白激酶C受体1(RACK1)突变体的真核表达质粒,进行RACK1突变体的表达、定位及其与胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)蛋白的共定位研究,为其进一步的功能研究奠定基础。方法以RACK1全长c DNA序列为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1-N(1-138)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1-C(130-317)-FLAG;Western blot法检测突变体在哺乳动物细胞中的表达;用免疫荧光技术了解突变体蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况。结果成功构建了RACK1突变体的真核表达质粒;Western blot法检测到蛋白主要在胞质中表达,核内有部分表达;免疫荧光实验表明,RACK1及突变体蛋白主要定位在胞质与核膜,细胞核中也有少量表达,与CLIC1蛋白存在共定位。结论成功构建了RACK1缺失突变体,并在真核细胞中成功表达;RACK1及突变体与CLIC1蛋白在哺乳动物细胞中均存在不同程度的共定位,蛋白之间可能存在相互作用,为RACK1蛋白的功能研究奠定了基础。 | 王蓓华 朱亮亮 刘晓颖 范礼斌 | 2015 | 安徽医科大学学报2015，50，11： | 0 |
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