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| 1 | Myod1和Myog真核共表达载体构建及鉴定显示文摘背景:目前研究发现,生肌调节因子家族的各成员之间具有相互协同和相互促进的作用。因此,联合应用Myod1和Myog两个成员进行基因治疗,可能会取得更好的疗效,能够为防治失神经支配骨骼肌萎缩寻找新的思路。目的:构建Myod1和Myog基因的真核共表达载体。方法:通过RT-PCR的方法克隆大鼠Myod1和Myog基因的全长cDNA,酶切后依次插入到pVAX1载体中,以构建重组的Myod1和Myog真核共表达载体pVAX1-Myod1-IRES2-Myog-IRES2-EGFP,采用基因测序的方法进行鉴定。将pVAX1-Myod1-IRES2-Myog-IRES2-EGFP对体外培养的3T3细胞进行转染,利用Western blot检测3T3细胞中Myod1蛋白和Myog蛋白的表达,验证其能否正确表达目的蛋白。结果与结论:基因测序结果表明,真核共表达载体pVAX1-Myod1-IRES2-Myog-IRES2-EGFP内的Myod1和Myog cDNA的序列长度及碱基顺序均与所公布的序列相同。将该载体转染到体外培养的3T3细胞内,Western blot能够检测到3T3细胞中Myod1和Myog蛋白的条带。结果证实,实验成功构建了重组Myod1和Myog真核共表达载体pVAX1-Myod1-IRES2-Myog-IRES2-EGFP。 | 高宏飞 梁炳生 双卫兵 | 2013 | 中国组织工程研究2013，17，37： | 3 |
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