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| 1 | 人LIGHT基因重组慢病毒的构建以及在脐血间质干细胞中的表达显示文摘目的构建带有人LIGHT基因的慢病毒载体,观察其在人脐血间质干细胞中的表达。方法通过逆转录聚合酶链反应从PCD DNA-LIGHI、质粒中获得人LIGHT基因,利用infusion技术重组构建慢病毒载体质粒pGC-FU-LIGHT,在脂质体lipofectamine 2000介导下与结构质粒pHelper1.0及包膜蛋白质粒pHelper2.0共转染293T细胞包装生产慢病毒。将人脐血间质干细胞分为实验组(pGC-FU-LIGHT)、空载体对照组(pGC-FU-EGFP)及空白组(脐血间质干细胞),分别用重组慢病毒、空载慢病毒、PBS感染后,采用RT-PCR以及Elisa检测IIGHT表达情况。结果所获LIGHT基因经测序后与Gene Bank报道序列完全一致;重组慢病毒载体质粒pGC-FU-LIGHT经鉴定正确;三质粒共转染293T细胞成功,收集、浓缩病毒后测定其滴度为2×107TUJ/L,感染UJCBMSCs后RT-PCR、Elisa检测各组细胞均有LIGHT的表达,其中试验组pGC-FU-LIGHT组更大最表达LIGHT,与其余2组(pGC-FU-EGFP、UJCBMSCs)比较差异具有统计学意义。结论成功构建带有LIGHT基因的慢病毒载体并实现在脐血间质干细胞中的表达,为间充质干细胞移植治疗胃癌的应用奠定了基础。 | 马贵亮 宣世英 朱新红 毛伟征 | 2013 | 临床普外科电子杂志2013，1，1： | 0 |
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