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| 1 | 重组质粒pVAX1-PENK大规模制备研究显示文摘目的:建立质粒pVAX1-PENK的大规模制备2--艺。方法:对大肠杆菌工程菌DH5α-pVAX1-PENK进行补料发酵,利用自行发明的连续碱裂解过程对菌体进行裂解,经超滤浓缩后,用Sepharnse 6 Fast Flow层析柱分离DNA与RNA,再经Plasmidselect Xtra层析柱分离超螺旋质粒DNA与开环或线性质粒DNA,最后经Source 15Q层析柱精制质粒DNA。结果:发酵获得质粒pVAX1-PENK的产率为182mg/L,经碱裂解及层析分离后,最终制备的质粒DNA超螺旋比例大于98%,总回收率为60.5%,纯度(D260nm/D280nm)为1.8~2.0。结论:建立的质粒DNA生产工艺可以制备大量高纯度的质粒DNA,并避免了使用动物源性的酶及有毒试剂。 | 蔡珍珍 胡春生 卢育新 程晓晨 柳伟 张庆林 | 2013 | 生物技术通讯2013，24，6： | 0 |
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