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1靶向白介素-1α基因沉默的Hela229稳定细胞系的构建显示文摘目的:构建针对IL-1α基因的shRNA表达载体,筛选能够抑制Hela229细胞内源性IL-1α表达的shRNA,建立无内源性IL-1α表达的Hela229稳定细胞系。方法:根据shRNA的设计原则,以IL-1αcDNA oligo为模板设计一段21 bp核苷酸目标序列,构建成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制IL-1α基因的重组shRNA质粒,转染Hela229细胞,经G418筛选后获得单克隆稳定细胞株,用ELISA方法在蛋白水平上检测IL-1α基因的沉默效果。结果:经酶切鉴定和测序分析确定IL-1α-shRNA重组质粒构建正确,ELISA筛选出能够显著抑制内源性IL-1α表达的shRNA,获得沉默内源性IL-1α表达的单克隆稳定的Hela229细胞株。结论:靶向IL-1α基因的重组shRNA表达质粒可显著抑制Hela229细胞内源性IL-1α的表达,成功构建靶向IL-1α基因沉默的Hela229稳定细胞系。张宁洁 张丽娜 李伟 林琳 高劲松 程文 余平 2013激光生物学报2013,22,5:0
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