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| 1 | 一种HBV研究的新动物模型-喜马拉雅旱獭β-actin基因的克隆及序列分析显示文摘目的 喜马拉雅旱獭对土拨鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus,WHV)高度易感,可作为HBV感染的新动物模型.本研究对喜马拉雅旱獭β肌动蛋白(β-actin)的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析,为喜马拉雅旱獭在HBV感染研究中的应用奠定基础.方法 根据Genbank的土拨鼠β-actin cDNA的序列设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭β-actin cDNA序列;PCR产物纯化后连接至T载体(pMD18-T),构建重组质粒pMD18-T-mhActin.对重组质粒进行PCR初筛及酶切鉴定,选择阳性克隆测序;对所获得的序列进行同源性和种系进化分析.结果 获得的旱獭β-actin序列为349 bp(nt887~1 235),其中编码序列为323 bp(nt-887~1209),编码106个氨基酸,包含形成二硫键的2个丝氨酸位点(氨基酸16和氨基酸105)及与β-actin功能相关的2个ATP结合位点、6个凝溶胶蛋白结合位点和6个profilin结合位点.同源性分析发现上述序列与其它哺乳动物β-actin的同源性均高达88 %以上,与土拨鼠β-actin的同源性最高(99.69 %),其氨基酸序列的同源性为100 %.种系进化树分析提示喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的亲缘关系最近,其次为其它啮齿类动物.结论 成功克隆了喜马拉雅旱獭β-actin的部分序列.序列分析发现喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的同源性最高. | 冯雪梅 尹莹 李安意 朱珍妮 陶元清 王忠东 陆蒙吉 杨东亮 王宝菊 | 2011 | 医学分子生物学杂志2011，8，2： | 5 |
| 2 | 中国旱獭(M.himalayana)GAPDH分子的部分cDNA克隆及序列分析显示文摘目的对新近建立的乙肝研究动物模型喜马拉雅旱獭3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析.为该模型在HBV感染研究中的应用奠定基础。方法根据Genbank的人GAPDHeDNA的序列设计特异性引物.以提取的旱獭脾组织总RNA为模板,RT-PCR扩增旱獭GAPDH cDNA序列。纯化的PCR产物连接至T载体(pMD18-T),然后构建重组质粒pMD18-T-mhGAPDH。对重组质粒进行PCR初筛、酶切鉴定,将阳性克隆测序。对序列进行同源性以及种系进化分析。结果扩增的旱獭GAPDH序列为535bp,编码序列为533bp(nt3-335),编码177个氨基酸。获得的序列和其它类哺乳动物GAPDH的同源性均在88%以上,其中与土拨鼠GAPDH的同源性最高(99.62%),氨基酸序列同源性高达100%。构建种系进化树,分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最接近。结论成功的克隆了喜马拉雅旱獭GAPDH的部分序列。序列分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最近,同源性最高。 | 朱彬 王宝菊 朱珍妮 黄顺梅 宋志韬 李安意 陶元清 王忠东 陆蒙吉 杨东亮 | 2014 | 医学分子生物学杂志2014，11，2： | 1 |
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