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| 1 | 小鼠脂肪源间充质干细胞的培养鉴定及增强绿色荧光蛋白-慢病毒载体转染显示文摘目的探索脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)的分离培养方法、生长特性及筛选出慢病毒载体感染间充质干细胞的最佳感染指数(MOI),并鉴定其感染后的增殖能力,为ADMSCs移植治疗急性肾小管损伤提供实验依据。方法取4周龄昆明小鼠腹股沟脂肪组织,差速贴壁法培养分离昆明小鼠脂肪源间充质干细胞。经细胞培养液洗涤、离心后接种于细胞培养瓶,放置体积分数5%CO2孵箱中培养,24h后换液,以后每3d更换培养基,待细胞融合达到约90%时,传代培养。取第3代ADMSCs用流式细胞术(FCM)检测其表型、茜素红染色及油红O染色鉴定其多向分化潜能;用携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)的慢病毒载体(LV)感染ADMSCs,FCM检测病毒感染效率,四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法检测感染后的细胞活力。结果(1)差速贴壁法培养分离7-11d时细胞融合达80%以上。原代细胞融合达80%~90%进行1:4传代,细胞贴壁和生长速度快于原代细胞培养。第3代及再传代细胞形体趋于一致,细胞呈梭形。细胞连续传代10次,生长速度未见明显减缓;(2)FCM检测第3代细胞CD29阳性表达98.93%,CD34阳性表达0.17%;(3)第3代细胞成脂诱导14d油红O染色阳性,成骨诱导14d茜红染色阳性;(4)当MOI=25感染第3代细胞72h后,共聚焦荧光显微镜观察细胞EGFP阳性表达60%~70%,细胞活力不受影响;(5)MrIT法显示重组慢病毒转染细胞与未转染慢病毒细胞比较,细胞增殖能力无差异。结论从昆明小鼠腹股沟脂肪组织中分离的ADMSCs可在体外稳定传代;差速贴壁法可以简便、高效地提取ADMSCs;携带EGFP的LV可有效感染ADMSCs,并且感染后其增殖能力不受影响。 | 谢遂亮 杨达胜 毕凌云 胡丹 | 2013 | 新乡医学院学报2013，30，11： | 3 |
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