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| 1 | 人白细胞介素32γ基因重组腺病毒载体的构建及鉴定显示文摘目的构建人白细胞介素32γ(IL-32γ)基因重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法从表达质粒pDONR223中扩增目的片段IL-32γ,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV获得pShuttle-(ΔGFP)-IL-32γ,经I-CeuI+I-SceI双酶切处理后转移至腺病毒载体pAdxsi,得到Ad-IL-32γ进行PCR鉴定及滴度测定。将Ad-IL-32γ转染至人胚肾细胞HEK293中,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)确定Ad-IL-32γ的转染效率,并通过Western印迹检测目的基因IL-32γ的表达。结果目的片段IL-32γ转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle-(ΔGFP)-IL-32γ正确。酶切穿梭载体将目的基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-IL-32γ病毒载体,酶切鉴定证实构建成功。Ad-IL-32γ病毒滴度为2×1010pfu/ml。转染HEK293细胞通过观察GFP判断转染效率,并通过Western印迹证实其在HEK293中的表达。结论成功构建IL-32γ重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达IL-32γ蛋白,为进一步基于Ad-IL-32γ的基因治疗研究奠定基础。 | 李松林 朱妍妍 李霏 尹元琴 | 2013 | 中国老年学杂志2013，33，23： | 1 |
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