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1DNA修复蛋白Ku70酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活检测显示文摘目的构建Ku70蛋白酵母双杂交诱饵载体,为研究Ku70及其相互作用蛋白在乳腺癌中的作用机制奠定基础。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从人宫颈癌HeLa细胞株扩增出Ku70 cDNA全长片段,用SalⅠ和EcoRⅠ双酶切Ku70 cDNA片段后定向克隆到真核细胞表达载体pGBKT7,获得诱饵质粒pGBKT7-Ku70,经限制性内切酶酶切和测序鉴定后转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-Ku70的自激活作用,同时利用蛋白质免疫印迹检测诱饵蛋白Ku70的表达。结果 Ku70 cDNA正确克隆到载体pGBKT7,转化到酵母菌株AH109中的诱饵载体pGBKT7-Ku70经表型筛选证实无自激活作用,蛋白质免疫印迹检测显示pGBKT7-Ku70在酵母细胞中稳定表达诱饵蛋白Ku70。结论成功构建了Ku70蛋白酵母双杂交诱饵载体,并且在酵母菌株AH109中稳定表达。李郝 唐玉萍 2013医学综述2013,19,22:0
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