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| 1 | 两种分析miRNA相对表达量方法的比较研究显示文摘目的基于实时反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)基因表达相对定量的分析方法:GenEx软件分析与2(-ΔΔCT)法,建立一种简便、准确的miRNA相对定量方法。方法以HK-2细胞系cDNA为模板,进行PCR扩增,确定最佳退火温度;再倍比稀释该模板,用荧光定量PCR测定的Ct值作miR-122和miR-16的标准曲线,计算出相应miRNA的扩增效率。用荧光定量PCR测定健康者和乙型肝炎患者血清中内参miR-16和靶基因miR-122的表达,分别采用GenEx软件分析与2(-ΔΔCT)法来评价相对表达量。结果系列稀释法制作的标准曲线呈现较好的线性相关性,两种miRNA的标准曲线r2值均为0.999,miR-16的扩增效率为97%,miR-122扩增效率为107%。2(-ΔΔCT)法分析乙型肝炎患者血清中miR-122的表达较健康者增高了44.3倍,而GenEx软件分析为54.1倍。结论GenEx软件分析考虑了更多的影响因素,其结果比2(-ΔΔCT)法更可靠,适用于临床分析。 | 郑传浩 姚磊 李毅 | 2013 | 检验医学与临床2013，10，22： | 2 |
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