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| 1 | 应用dtSCT技术制备低亲和力抗原肽InsB_(15-23)肽的MHCⅠ四聚体显示文摘目的制备低亲和力InsB15-23抗原肽的MHCⅠ四聚体。方法应用二硫键捕获型单链三聚体(disulfide-trap singlechain trimer,dtSCT)技术,将InsB15-23抗原肽、小鼠β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)和H-2Kd分子以柔性接头(linker,L)依次连接,并在抗原肽的C末端与H-2Kd分子间引入了二硫键,以提高抗原肽与H-2Kd分子结合的稳定性。融合基因克隆入pET-22b原核表达载体,经过诱导表达、洗涤包涵体、稀释复性等步骤获得单体,生物素化后制成InsB15-23dtSCT型四聚体。结果我们比较了自制InsB15-23dtSCT四聚体和商品化G9V传统五聚体对小鼠外周血特异性CTLs的检出率。2种多聚体对阴性对照Balb/c小鼠都显示出很低的非特异性标记水平,都能检出4周龄NOD母鼠外周血中低水平的InsB15-23特异性CTLs,且二者的检出率无统计学差异。结论我们成功制备出稳定的InsB15-23dtSCT型四聚体。与商品化的传统五聚体相比,我们自制的四聚体具有类似的检出率和低非特异性标记水平。 | 潘兴元 蒋芳芹 梁锴 余鸣鸣 陈则东 窦延 季明春 焦新安 | 2013 | 免疫学杂志2013，29，12： | 2 |
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