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| 1 | PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体构建及干扰Leydig细胞株建立显示文摘目的:通过靶向过氧化物酶体增殖因子活化受体PPARγ基因阻断,建立稳定干扰Leydig细胞株TM3。方法:采用慢病毒四质粒包装系统构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,用以建立PPARγ基因稳定沉默的Leydig细胞株TM3。结果:经测序证实,成功构建编码表达PPARγ短发夹结构RNA(sh-PPARγ)的慢病毒载体LV3-sh-PPARγ及对照载体LV3-Control。病毒载体转导Leydig细胞株TM3后,荧光显微镜证实细胞转染效率>90%,Real-time PCR测定实验组TM3细胞PPARγ的mRNA表达比未处理细胞下降70%(P<0.05),对照组与未处理细胞差异无显著性(P>0.05)。Western blot显示实验组PPARγ蛋白表达量比未处理细胞明显下降(P<0.05),对照组与未处理细胞差异无显著性(P>0.05)。结论:成功构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNAi慢病毒载体LV3-sh-PPARγ及对照载体LV3-Control,并成功建立PPARγ表达稳定干扰的小鼠Leydig细胞株TM3,为PPARγ生殖毒性研究提供了新的细胞模型。 | 马明月 张磊 张玉敏 裴秀丛 段志文 | 2013 | 沈阳医学院学报2013，15，4： | 0 |
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