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| 1 | 少白细胞血小板miRNA提取方法显示文摘目的:建立常规梯度离心结合MACS磁珠分选纯化和小分子RNA分离试剂盒简便快速提取血小板miRNA的方法。方法:利用常规梯度离心获取血小板后,结合MACS磁珠分选和小分子RNA分离试剂盒提取少白细胞血小板(LDP)小分子RNA;经血小板计数、CD45和GPIIb mRNA marker PCR扩增检测,判定纯化效果;通过小分子RNA浓度、纯度及毛细管电泳完整性检测,以及内参U6和血小板miR-449b加尾及引物延伸RT-PCR后PCR扩增结果验证构建血小板miRNA的cDNA模板真实性。结果:提取小分子RNA纯度较高,有效去除白细胞污染,虽然含量较少,但内参U6和血小板miR-449b真实性验证结果提示,构建血小板miRNA的cDNA模板质量较高。结论:常规梯度离心结合MACS磁珠分选纯化和小分子RNA分离试剂盒,可有效去除白细胞污染,保证小分子RNA完整性,从而提取高质量血小板miRNA的cDNA模板,可用于后续血小板miRNA试验研究。 | 罗茂 万沁 刘飞 马卫中 吴剑波 | 2013 | 泸州医学院学报2013，36，2： | 0 |
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