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| 1 | RNA干扰沉默Smad3对人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原产生的影响显示文摘目的:转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)通过Smad3(drosophila mothers against decapentaplegic)依赖的细胞因子信号转导通路,促进Ⅰ型胶原的合成和分泌,在哮喘气道重塑中起重要作用。近年来RAN干扰技术在基因治疗及功能研究取得很大进步,本实验探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默Smad基因表达对人肺成纤维细胞(human lungfibroblast-1,HLF-1)合成I型胶原的影响。方法:设计并合成Smad3特异性小发卡干扰RNA(short hairpin RNAs,shRNA),用脂质体转染入培养的人HLF-1细胞,反转录聚合酶链反应(reverse transfection PCR,RT-PCR)法和蛋白质印迹(Western blot)法观察基因沉默效果,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)检测RNA干扰对人HLF-1细胞合成I型胶原的影响。结果:shRNA-Smad3成功转染入人HLF-1细胞并有效沉默Smad3的表达,RT-PCR结果显示shRNA-Smad3转染后Smad3mRNA表达与正常对照组和阴性对照组比较,分别降低68.2%和69.5%,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示shRNA-Smad3转染后Smad3蛋白表达与正常对照组正常对照组和阴性对照组比较,分别降低了67.1%和64.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示shRNA-Smad3转染后I型胶原为正常对照组和阴性对照组的59.3%和61.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:shRNA-Smad3能有效沉默HLF-1细胞中Smad3 mRNA和Smad3蛋白的表达,并减少HLF-1细胞Ⅰ型胶原的合成。为进一步应用干扰RNA技术治疗哮喘患者气道重塑提供新的思路。 | 焦娇 谢华 陈萍 马壮 孙文武 | 2013 | 现代生物医学进展2013,13,11: | 1 |
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