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| 1 | 副猪嗜血杆菌RfaF基因的原核表达及抗原性分析显示文摘副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)RfaF基因编码脂多糖庚糖基转移酶Ⅱ,参与了细菌的黏附入侵和抗血清中补体杀菌作用。为了进一步研究庚糖基转移酶Ⅱ的功能,用原核表达系统表达H.parasuis RfaF基因。用特异性引物扩增H.parasuis SC096株血清4型RfaF基因,得到一条1 053bp的片段,将其连接到pET-32a(+)载体上,构建重组表达质粒,并将其转化至DH5α感受态细胞中,经酶切、PCR和测序进行鉴定。测序正确后,提取重组质粒,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,并用IPTG进行诱导。将诱导产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,H.parasuis RfaF基因可以在E.coli中表达,重组蛋白分子质量约为55ku,与预期分子质量大小一致。Western blot分析表明,RfaF蛋白可以与H.parasuis血清4型阳性高免血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性。本研究结果为深入探讨RafF基因的功能奠定了基础。 | 冯晓辉 余远迪 任玉鹏 岳华 张斌 | 2013 | 动物医学进展2013，34，4： | 0 |
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