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| 1 | 外源性分化抑制因子Id2在C_2C_(12)细胞中的表达显示文摘目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,并观察外源性Id2基因C_2C_(12)细胞中的表达。方法:RT-PCR扩增出Id2全长cDNA,T4 DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2 cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoR I酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达栽体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;通过电穿孔转染法将外源性Id2基因导入C_2C_(12)成肌细胞中。分别于转染4、8、12、24、36、72 h后通过荧光倒置显微镜下观察细胞整体情况,并计算转染效率。结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2 cDNA片段,获得高转染率和高表达外源性Id2基因的C_2C_(12)细胞,转染8 h时,转染效率约为(10.5±2.8)%;转染12 h后,转染效率约为(20.9±3.1)%;转染24 h后,转染效率最高,约为(60.8±3.2)%。结论:成功构建了同时携带有G418筛选位点和Id2基因的真核表达载体;并获得高表达外源性Id2基因的C_2C_(12)细胞。 | 赖桂华 余磊 张黎声 欧阳钧 邱小忠 | 2012 | 广州医学院学报2012，40，4： | 0 |
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