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| 1 | 慢病毒介导的RNAi对卵巢癌细胞增殖及间皮素表达的影响显示文摘目的:构建间皮素(mesothelin,MSLN)RNAi重组慢病毒质粒,探讨其对卵巢癌OVCAR-3细胞MSLN的表达及细胞增殖的影响。方法:根据MSLN基因信息,设计了4个小干扰序列和1个阴性对照序列,利用慢病毒质粒载体pRNAT-U6.2/Lenti构建了5个重组质粒并进行了慢病毒包装,分别为LV-MSLN-negative、LV-MSLN-shRNA2、LV-MSLN-shRNA3、LV-MSLN-shRNA4;感染OVCAR-3细胞后,Westernblotting和荧光免疫组化检测干扰效率,选择干扰效率高的质粒载体进行慢病毒大量包装;感染卵巢癌细胞OVCAR-3后,用细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖的变化。结果:测序结果证明5种质粒载体的插入序列完全正确,鉴定证明慢病毒包装成功。慢病毒感染OVCAR-3细胞后,Westernblotting证实重组慢病毒LV-MSLN-shRNA4的干扰效率最高,对MSLN蛋白表达的抑制达90%。荧光免疫组化的共聚焦照片显示干扰组(OVC-shRNA)定位于细胞膜的MSLN蛋白表达明显弱于阴性对照组(OVC-neg)和空白对照组(OVC)。OVC-shRNA组细胞增殖[(11.2±1.3)×105]显著慢于OVC-neg组[(20.5±2.5)×105]和OVC组[(21.9±2.3)×105](P<0.05)。OVC-shRNA组克隆形成率为(15.2±2.1)%,明显低于OVC-neg组[(27.9±2.5)%]和OVC组[(28.8±3.1)%](P<0.05)。结论:成功构建MSLNRNAi重组慢病毒质粒LV-MSLN-shRNA4,它能有效抑制卵巢癌OVCAR-3细胞的MSLN表达及细胞增殖,为进一步研究MSLN应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。 | 王莉 李娜 吴小华 | 2008 | 中国肿瘤生物治疗杂志2008，15，2： | 5 |
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