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| 1 | GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定显示文摘目的构建人乳头瘤病毒18型早期蛋白2(HPV18 E2)删除突变体N端(TAD)、C端(DBD)与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,为研究HPV18 E2基因与宫颈癌发生的关系提供实验基础。方法用PCR扩增HPV18 E2 TAD、DBD基因序列,用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-C1载体与TAD、DBD基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定。结果阳性克隆质粒经双酶切后,琼脂糖凝胶电泳可见4.7 kb6、18 bp和243 bp附近的片段。DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒分别含有618 bp与243 bp的目的基因片段,无碱基错配和移码突变,读码框完全正确。结论成功地构建了GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1/TAD与pEGFP-C1/DBD。 | 陈春莲 彭俊 余敏君 尹卫国 朱翠明 万艳平 | 2007 | 南华大学学报(医学版)2007，35，5： | 1 |
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