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| 1 | 高迁移率族蛋白1在大肠埃希菌中的高效表达以及纯化显示文摘目的克隆、表达高迁移率族蛋白1(HMGB1)。方法从人外周血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得HMGB1基因;将该基因克隆到PMD18-T载体中,测序鉴定;将HMGB1基因插入pET32-A表达载体中,30℃诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA亲和层析纯化后用Western-Blot证实。结果DNA测序证明,获得了HMGB1基因,其序列与Gen Bank中报道序列完全一致;SDS-PAGE分析表明,HMGB1蛋白在原核中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的32%;诱导表达产物主要以包涵体形式存在,6 His-NTA纯化后获得目的蛋白,Western-Blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性。结论成功表达和纯化了HMGB1基因。 | 姜南艳 张伟 任君萍 顾炳权 沈建军 张惠中 | 2007 | 现代检验医学杂志2007，22，3： | 1 |
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