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| 1 | PTEN基因亚克隆和pTRE-PTEN反应质粒构建显示文摘目的 亚克隆野生型与张力蛋白在 10号染色体同源缺失的磷酸酶 (PTEN)基因 ,构建四环素反应性元件调控的与张力蛋白在 10号染色体同源缺失的磷酸酶反应质粒 (pTRE PTEN)。方法以pBP PTEN质粒为模板 ,应用pfuDNA聚合酶 ,多聚酶链反应法 (PCR)扩增PTENcDNA。将扩增的PTENcDNA与三磷酸脱氧腺苷 (dATP)反应 ,然后将产物与pGEM T Easy载体直接连接 ;连接产物转化大肠杆菌DH5α,蓝白筛选 ,挑选白色克隆作鉴定测序。将测序正确的pGEM T Easy/PTEN和带潮霉素筛选标记的四环素反应性元件质粒 (pTRE2Hyg)分别双酶切 ,前者回收 1.2kb的PTEN片段 ,后者回收线性化的pTRE2Hyg片段 ,将两者连接成 pTRE PTEN表达重组体 ,转化大肠杆菌DH5α ,抽提重组体质粒 ,经NotⅠ和SalⅠ酶切鉴定阳性克隆含有大小约 6 .4kb和 1.2kb的两条带。结果 成功地从 pBP PTEN质粒中亚克隆人PTENcDNA ,并构建了pTRE PTEN反应质粒。结论 pTRE PTEN反应质粒的构建为建立pTet on PTEN | 黄安炀 章翔 陈长春 李霞 刘新平 | 2004 | 中华神经外科疾病研究杂志2004，3，5： | 1 |
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