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| 1 | 猪肌生成抑制素C末端80氨基酸编码基因的合成及其原核表达显示文摘将猪肌生成抑制素编码序列下游 883~ 1 1 2 6 bp按大肠杆菌嗜好密码子进行优化 ,将优化后序列双链分成 1 2个单链片段 (F1 、F2 、F3、R6 、R5、R4 、F4 、F5、F6 、R3、R2 、R1 ) ,采用化学合成方法合成 ,每对相邻互补片段之间有 2 0 bp序列交叉重叠。F1 长 38bp,R1 长 36 bp,其他片段均 4 0 bp长 ,F1 和 R1 片段两端分别加上限制性内切酶 Nco 和 Xho 的识别位点序列。经 PCR扩增出 2 5 4 bp片段 ,该片段与 p MD1 8- T载体连接 ,转化 JM1 0 9感受态细胞 ,所得阳性克隆进行测序分析 ,得到的克隆序列与设计的序列完全一致 ,表明成功地获得了猪肌生成抑制素下游编码序列克隆载体。从阳性细菌中提取质粒 ,经 Nco 和 Xho 酶切 ,回收 2 5 4 bp目的片段 ,定向克隆到 p ET2 8a中 ,转化 DH5α受体菌 ,提取质粒 ,再转化到 BL2 1 (DE3)中 ,成功筛选出阳性克隆。阳性菌经 IPTG诱导 ,通过 SDS- PAGE。 | 吕文发 张英霞 欧阳红生 梁冠生 李树伟 张永亮 | 2003 | 兽医大学学报2003，23，3： | 5 |
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