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| 1 | 登革Ⅱ型病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域在大肠杆菌中的表达及免疫反应性鉴定显示文摘目的在大肠杆菌中表达登革Ⅱ型病毒包膜糖蛋白(E)的第一,二结构域(DⅠ/Ⅱ)并进行免疫反应性鉴定。方法登革Ⅱ型病毒接种乳鼠,提取总RNA,经RT-PCR扩增目的基因片段。双酶切PCR纯化产物和质粒pET-28a(+)并连接构建重组质粒pET28a-DV2-E-D1&2。筛选阳性菌落,提取质粒并转化感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白并进行SDS-PAGE分析,Western blot鉴定。结果 RT-PCR扩增得到约900bp的目的基因片段,双酶切及测序分析表明,插入序列正确且开放读码框正确。重组菌诱导后在37kD位置有明显的诱导后表达带,其大小与预测值一致。经12%SDS-PAGE分析,显示重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中;Western blot结果显示重组蛋白与His.Tag单抗和登革病毒单抗(D1-11)均发生反应。结论成功地在大肠杆菌中表达登革Ⅱ型病毒包膜糖蛋白(E)的DⅠ/Ⅱ,免疫反应性鉴定结果表明其具有良好的免疫反应性。 | 付宇姣 郑学礼 | 2012 | 中国人兽共患病学报2012，28，5： | 2 |
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