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1顶体素结合蛋白真核表达载体的构建及其在肝癌细胞株的表达显示文摘目的:构建ACRBP真核表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础。方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒。通过Fugene HD将该重组质粒转染至ACRBP表达阴性的肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性克隆获得稳定转染株。RT-PCR和免疫组织化学方法检测HepG2细胞中ACRBP的表达情况。结果:pEG-FP-N1/ACRBP真核表达载体经测序证实插入序列完全正确;ACRBP基因已经稳定转染至HepG2细胞中并获得表达。结论:成功构建了pEGFP-N1/ACRBP真核表达载体并将其转染HepG2后,能稳定地表达ACRBP。罗彬 云翔 林永达 肖绍文 闫光华 何少健 贺菽嘉 陈芳 谢小薰 2011细胞与分子免疫学杂志2011,27,10:1
2卵巢癌细胞中OY-TES-1基因启动子CpG位点甲基化状态分析显示文摘目的:了解卵巢癌SKOV3细胞中OY-TES-1启动子区域CpG位点的甲基化状态。方法:运用免疫细胞化学法检测SKOV3细胞中OY-TES-1蛋白表达;通过硫化测序PCR法,分析SKOV3细胞中OY-TES-1启动子区域CpG位点的甲基化状态,并与睾丸组织相比较。结果:免疫细胞化学法检测结果显示,SKOV3细胞中OY-TES-1蛋白呈阳性反应;在检测的OY-TES-1启动子区域(转录起始点-127bp-+110bp,含24个CpG位点)中,CpG位点的甲基化频率为80.21%,其甲基化状态明显高于睾丸组织。结论:SKOV3细胞中OY-TES-1启动子CpG位点处于高甲基化状态,进一步可探讨甲基化抑制剂氮杂脱氧胞嘧啶对OY-TES-1甲基化状态及其表达水平的影响。范蓉 黄巍 郭文文 王炜炜 罗彬 宋慧 肖绍文 谢小薰 2011解剖学杂志2011,34,6:0
3精子蛋白32的表达及酪氨酸磷酸化调控猪精子顶体蛋白的活化显示文摘为了探究猪精子蛋白32(Sperm protein,sp32)表达及酪氨酸磷酸化调控猪精子顶体蛋白活化的关系,本研究对不同处理(鲜精、冷冻-解冻、获能、顶体反应)的猪精子顶体膜蛋白进行分离,通过考马斯亮蓝染色、SDS-PAGE电泳和Western blot检测和分析。结果表明,猪精子经过获能处理、冷冻-解冻处理以及顶体反应处理后,前顶体蛋白(Proacrosin)和顶体蛋白(Acrosin)在转化过程中,sp32表达有所差异,获能和顶体反应处理的sp32的表达量略高于冷冻-解冻处理组,而显著高于鲜精处理组。与其他处理组相比,冷冻-解冻精子处理组sp32酪氨酸磷酸化水平产生显著的差异。但在SDS-PAGE电泳中,猪鲜精处理组在蛋白质分子质量38~170ku区间的蛋白表达条带较其他对比组明显,这表明猪精子在受精前所必需经历的获能和顶体反应过程中,顶体膜蛋白伴随着大分子的蛋白质修饰和降解。结论:sp32作为一种前顶体蛋白结合蛋白,在前顶体蛋白活化过程中它的表达水平及酪氨酸磷酸化水平上调。孙培亮 崔明勋 姜园园 曹立朋 金一 2013畜牧兽医学报2013,44,8:0
4睾丸组织中ACRBP的表达及启动子CpG位点的甲基化分析显示文摘目的了解人睾丸组织中ACRBP的表达及其启动子CpG位点的甲基化状态,为探讨该基因表达机制奠定基础。方法运用免疫组化法研究睾丸组织中目的蛋白定位;结合生物信息学分析该基因启动子CpG位点序列;通过Bisulfite PCR测序法(BSP)分析目的基因CpG位点的甲基化状态。结果免疫组化显示精子与精子细胞及部分的精原细胞和精母细胞表达目的蛋白。对ACRBP启动子序列(转录起始点-127~+110 bp)进行BSP扩增测序,发现该区域共有24个CpG位点,其中仅有3个出现甲基化,其甲基化频率为1.67%。结论生精小管中ACRBP蛋白呈区域性的阳性反应,可能与生精小管内精子发生的不同步性有关;ACRBP启动子CpG位点低甲基化可能与该基因表达的机制有关。黄巍 范蓉 李希圣 郭文文 罗彬 宋慧 肖绍文 谢小薰 2011山东医药2011,51,47:0
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