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| 1 | PAM14缺失突变体在哺乳动物细胞中的表达和定位显示文摘目的构建带HA标签(标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇)的PAM14缺失突变体PAM14-N和PAM14-C的真核表达载体,将其分别转染至COS7细胞中观察PAM14-N和PAM14-C蛋白在细胞内的定位,并转染至HEK293T细胞检测其是否表达。方法以含人PAM14全长cDNA序列的质粒pACT2-PAM14为模板,PCR法扩增PAM14-N-HA,BamHⅠ和HindⅢ双酶切后插入真核表达载体pCDNA3.1中,同理构建pCDNA3.1-HA-PAM14-C,将重组表达质粒pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C分别转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测。结果经测序鉴定,成功构建了真核表达载体pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C,转染后荧光显微镜观察PAM14-N在COS7细胞中主要定位于细胞核,PAM14-C定位不明显;经Western blot检测PAM14-N在HEK293T细胞中能够有效表达,PAM14-C无表达。结论实验结果确定了PAM14功能最小区域及PAM14-N的定位和表达,为进一步了解PAM14的功能奠定了基础。 | 杨军 陈应炉 汪云飞 朱恒锐 刘晓颖 范礼斌 | 2011 | 安徽医科大学学报2011，46，2： | 0 |
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