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| 1 | 小鼠Smad6慢病毒干扰载体的构建及筛选显示文摘体外构建及筛选小鼠Smad6重组慢病毒干扰载体,并在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中检测其干扰效果。通过分子克隆技术应用携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒构建三个重组Smad6 RNA干扰载体,并通过DNA测序确定基因重组的正确性。培养小鼠BMSCs,并用骨形态发生蛋白2(BMP2)进行骨向诱导。应用激光共聚焦技术确定重组病毒的转染效率,并通过Real-time PCR和Western blot对Smad6基因的干扰效果进行检测。实验成功构建了三个Smad6重组慢病毒干扰载体,DNA测序证实了基因重组的正确性。重组病毒转染间充质干细胞(MSCs)后,GFP均得到了有效表达,达到了较高的转染效率(>95%)。经Real-time PCR和Western bloot检测,#2重组载体对Smad6基因表达的干扰效果最佳,蛋白水平干扰效率接近91%。本实验成功构建了小鼠Smad6基因有效重组干扰载体,为BMP信号通路的进一步研究提供了有效的实验工具。 | 于静 戚孟春 邓久鹏 刘刚 陈槐卿 | 2010 | 生物医学工程学杂志2010，27，5： | 4 |
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