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1PcDNA3.1-rhGM-CSF重组质粒的构建及生物活性鉴定显示文摘目的构建PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体,初步观察其对髓系白血病细胞K562细胞生长的影响。方法采用PCR、T-A克隆及基因定向克隆技术,将rhGM-CSF基因插入PcDNA3.1(+)空载体,构建了PcD-NA3.1-rhGM-CSF真核表达载体。经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。转染人髓系白血病细胞K562细胞72h后,采用RT-PCR方法、NBT试验、MTT试验、免疫组化技术,观察和分析PcDNA3.1-rhGM-CSF在K562细胞中的表达及其对该细胞的影响。结论成功构建了PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体;重组质粒PcDNA3.1-rh-GM-CSF能在K562细胞中表达;部分K562细胞向单核细胞系、巨噬细胞系分化。朱红 唐恩洁 2010西部医学2010,22,3:0
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