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| 1 | 重组人瘦素融合蛋白在大肠杆菌中的低温自诱导表达、纯化和活性鉴定显示文摘目的:建立低温自诱导表达重组人瘦素(leptin)融合蛋白的系统方法,经体外纯化获得大量具有生物活性的瘦素蛋白。方法:从cDNA文库中扩增瘦素编码区,克隆到pGEM-Teasy载体,测序正确后亚克隆到A1.3表达载体,转入BL21(DE3),低温自诱导表达。用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定表达产物。对低温自诱导表达产物rMBP-10His-Leptin进行纯化和酶切,获得可与瘦素单抗发生特异性反应的瘦素蛋白。用Km小鼠减肥实验检验其生物学活性。结果:在22×103处有明显的新增蛋白带,含量超过总蛋白的40%,Western印迹证实为瘦素蛋白。Km小鼠减肥实验证实其具有生物学活性。结论:成功建立了低温诱导表达rMBP-10His-Leptin的系统方法,获得大量瘦素蛋白,经验证表达产物具有免疫活性和生物学活性,可供进一步基础及临床研究应用。 | 曾沃坦 单永强 王晓霞 黄炜 陈小军 周骋 | 2008 | 军事医学科学院院刊2008，32，5： | 3 |
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